2011年 · 第46卷第02期

目的 利用以Cre-loxP为基础的位点特异性重组系统Cre-loxP*构建变形链球菌的htrA和clpP双基因缺失突变株,为利用该系统构建无标记的多基因缺陷株奠定基础.方法 将htrA基因克隆到pGEM-T-Easy TA载体,并插入卡那霉素抗性基因愈(lox71-Km-lox66)使htrA基因失活,获得htrA基因删除载体pGEM-T-△htrA/Km.用相同方法构建带有大观霉索抗性标记的clpP基因删除载体pGEM-T-△clpP/Sp.用pGEM-T-△htrA/Km转化变形链球菌标准株,筛选出发生同源重组的菌株.用cre表达质粒pCrePA转化同源重组菌株,删除抗性基因.由于pCrePA的热敏复制子,改变温度培养可消除pCrePA,得到无标记的htrA基因缺失突变株MS△htrA,并经聚合酶链反应(PCR)及DNA测序鉴定.用同样的方法在MS△htrA中删除clpP及大观霉索抗性标记,获得无标记的htrA和clpP双基因缺失突变株MS△htrA-△clpP.结果 PCR及DNA测序鉴定结果表明,htrA和clpP基因及抗性标记已被删除,无标记的htrA和clpP双基因缺失突变株成功构建.结论 利用位点特异性重组系统Cre-loxP*初步构建出变形链球菌的无标记htrA和clpP双基因缺失突变株,为将该系统应用于构建口腔变形链球菌无标记的多基因缺陷株提供了实验依据。

目的 通过研究唑来膦酸胶原膜对骨代谢细胞的影响,探讨该载药膜是否具有抑制局部骨吸收、促进局部骨形成的能力.方法 分别以双层胶原膜(Bio-Gide(R))和单层胶原膜(BME-10X(R))为载体,吸附不同浓度唑来膦酸(zoledronic acid,ZA),制备唑来膦酸胶原膜,分别命名为BG0、BG1、BG2、BG3组和BM0、BM1、BM2、BM3组(BG代表双层胶原膜,BM代表单层胶原膜,0、1、2、3分别代表唑来膦酸浓度为0、1×10-4、1×10-3、1×10-2 mol/L),设置无胶原膜组为空白对照组.通过离体细胞培养,评价唑来膦酸胶原膜对破骨细胞和成骨细胞的影响.结果 唑来膦酸胶原膜与破骨细胞体外共培养显示:培养第7大,BG1、BG2、BG3、BM1、BM2、BM3组骨吸收陷窝面积百分比分别为18.80%、14.75%、14.28%、20.51%、15.77%、15.12%,明显低于BG0(31.53%)和BM0(32.22%,P＜0.05),载药量越高,其抑制效果越强.唑来膦酸胶原膜与成骨细胞体外共培养显示:培养第7天,BG2组增殖指数(7.00)明显高于BG0(6.90);培养第4天,BG2、BG3、BM2、BM3组碱性磷酸酶表达(分别为154.67、154.33、155.33、152.00 U/g)明显高于BG0(129.33 U/g)和BM0(127.67 U/g,P＜0.05).结论 唑来膦酸胶原膜可同时具有抑制骨吸收和促进成骨细胞增殖的能力。

目的 通过多导睡眠监测分析儿童夜磨牙症患者睡眠电生理及睡眠结构方面的改变,初步探讨夜磨牙症与睡眠电生理的关系.方法 分别选择12例严重夜磨牙症儿童患者(磨牙症组)及11名健康儿童(健康对照组)进行多导睡眠监测,并行统计学分析.结果 磨牙症组儿童非快速动眼睡眠Ⅱ期及Ⅳ期所占比例分别为(45.7±7.1)%和(19.2±4.9)%,而健康对照组分别为(52.9±5.8)%和(13.3±5.3)%,差异均有统计学意义(P＜0.05).磨牙症组儿童的睡眠效率[(84.0±8.0)%]及睡眠潜伏期[(39.33±28.73)min]与健康对照组相比[分别为(94.0±3.7)%和(10.27±7.57)min]差异均有统计学意义(P＜0.01).结论 夜磨牙症儿童存在睡眠结构紊乱。

目的 回顾和分析我国内地口腔医学期刊自1949年以来的历史和现状.方法 调查中文数据库、相关网站和图书资料,获取1949至2009年口腔医学期刊有关信息、国家相关经济指标和口腔学科发展情况等,并对其进行比对分析.结果 我国口腔医学期刊种类从1949年1种4期/年增至2009年32种204期/年,国内生产总值(gross domestic product,GDP)由1949年679亿增至2008年300 670亿元.结论 60年来我国内地口腔医学期刊的种类和数目增长迅速,与国家政治、经济和学科发展有关,预计未来还将有进一步的发展。

上一讲介绍了侵权责任法与医疗损害责任的立法意义、法律对利益冲突的平衡功能以及医疗损害责任与有关法律的衔接.本讲继续就医疗损害责任之侵权责任认定做一解读,同时附以案例报告。

亚里斯多德说:"美是比任何介绍信都要有用的推荐函."这并不公平,但却是事实.因此,美学要求是未来牙科治疗发展的重要内容之一.美是形态美和功能美的和谐统一。

2010年12月1至4日,首届全球华人口腔医学大会暨2010中国国际口腔医学大会、2010中国口腔设备器材展览会在福建省厦门市隆重召开,这是继2006年在广东省深圳市召开的世界牙科联盟(FDI)年会之后,我国口腔医学界的又一盛会。

目的 观察牙周非手术治疗对2型糖尿病伴慢性牙周炎(chronic periodontitis,CP)患者牙周状况、糖代谢及血清白细胞介素6(IL-6)的影响,探讨其可能的影响机制.方法 选取2型糖尿病伴慢性牙周炎(type 2 diabetes mellitus with chronic periodontitis,DMCP组)和不伴有全身系统性疾病的CP患者(CP组)各55例进行牙周非手术治疗,其中DMCP组中糖化血红蛋白(glycated hemoglobin,HbA1c)＜7.00%的患者为血糖控制较好组(A1组),HbAlc≥7.00%的为血糖控制较差组(A2组).在治疗前及治疗后6周、3个月时分别记录全口探诊深度(probing depth,PD)、附着丧失(attachment loss,AL)、出血指数(beeding index,BI)和菌斑指数(plaque index,PLI),并检测空腹血糖(fasting plasma glucose,FPG)、HbA1c及血清IL-6水平.结果 DMCP组和CP组PD、AL、BI、PLI和血清IL-6水平在治疗后6周及3个月时均显著降低(P＜0.05),其中DMCP组血清IL-6从(3.47±0.33)ng/L(治疗前)显著降至(3.21±0.66)ng/L(治疗后6周),再降至(3.03±0.54)ng/L(治疗后3个月).DMCP组治疗后3个月HbA1c水平[(6.80±1.21)%]与治疗前[(7.35±1.73)%]相比显著降低(P＜0.05),其中A2组HbA1c水平从治疗前的(8.72±1.51)%显著降至治疗后3个月的(7.59±1.28)%(P＜0.05),而A1组HbA1c水平则无明显变化(P＞0.05).结论 牙周非手术治疗能够降低DMCP患者血清IL-6水平,并在一定程度上改善患者糖代谢状况;该治疗能显著改善血糖控制较差者的糖代谢,而对血糖控制较好者的糖代谢则无明显影响。

目的 评价牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,Pg)口腔内低剂量、长期、多次接种是否可影响载脂蛋白基因敲除小鼠(apolipoprotein E-knocked out,ApoE-/-)的动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)形成进程和病变程度.方法 20只C57BL/6背景小鼠,将其中13只种属为C57BL/6背景的ApoE-/-小鼠按随机数字表随机分成两组,实验组7只使用1013个/L的牙周致病菌Pg进行口腔内涂菌接种,持续15周共75次,对照组6只同法口腔内涂擦无菌肉汤培养基,比较两组小鼠体质量、血总胆固醇、三酰甘油及主动脉AS病损面积及病理组织变化的情况.另7只野生型C57BL/6小鼠取其主动脉组织作为正常对照.结果 实验组ApoE-/-小鼠主动脉AS病损平均面积为(98 363.68±12 043.00)μm2,显著大于未接种的小鼠对照组[平均病损面积(62 985.06±7419.64)μm2],P=0.035;两组体质量、血总胆固醇和三酰甘油差异均无统计学意义;与野生型C57BL/6小鼠正常主动脉相比,ApoE-/-小鼠主动脉内壁均有凸向管腔内的AS病损,且动脉壁变平,实验组较对照组AS斑块更明显,动脉管腔更狭窄.结论 Pg口腔内低剂量长期多次接种可以加速ApoE-/-小鼠AS的进展。

目的 探讨反义微小RNA-21寡核苷酸(antisense oligonucleotide micro RNA-21,AS-miRNA-21)抑制Tb3.1人舌鳞状细胞癌增殖的效果和机制.方法 实验分3组,①空白对照组;②无义寡核苷酸转染组;③AS-miRNA-21转染组.寡核苷酸介导转染反义寡核苷酸敲低Tb3.1细胞miRNA-21表达.使用荧光实时定量聚合酶链反应(PCR)鉴定转染后Tb 3.1细胞miRNA-21表达水平;甲基噻唑基四唑(MTT)法检测转染后Tb 3.1细胞生存率;流式细胞术检测转染后Tb3.1早期凋亡;Matrigel基质生长实验检测转染后Tb 3.1细胞生长形成球形集落能力;Transwell体外迁移实验检测转染后Tb 3.1细胞迁移能力;蛋白质印迹法检测转染后Tb3.1细胞增殖核抗原(antigen KI-.67,Ki67)、B细胞淋巴瘤2(B cell lymphoma 2,Bcl-2)、人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源的基因(phosphatase and tensin homolog,PTEN)、基质金属蛋白酶2、9(matrix metalloproteinase 2/9,MMP-2、MMP-9)和组织基质蛋白酶抑制因子蛋白1(tissue inhibitor of metalloproteinase 1,TIMP-1)蛋白表达.结果 荧光实时定量PCR显示转染后miRNA-21表达水平下调;转染第4天,AS-miRNA-21转染组肿瘤细胞生长速度[(53.43±11.83)%]低于其他两组[(91.32±8.02)%和100%](F=27.02,P=0.00);细胞凋亡率显著升高[(12.23±2.92)%,F=26.641,P=0.001];AS-miRNA-21转染组细胞生长不能形成球形克隆且通过Transwell小室聚碳酸酯膜的细胞数小于空白对照组(F=268.231,P=0.000);Ki67、Bcl-2、MMP-2和MMP-9蛋白表达下调,PTEN和TIMP-1蛋白表达上调.结论 敲低miRNA-21后Tb3.1人舌癌细胞增殖与侵袭能力被抑制,并为探索miRNA-21调控人舌癌发生机制提供实验依据。

目的 评价37%磷酸处理牙本质不同时间对牙本质Ⅰ型胶原降解的影响,以期为临床牙本质粘接操作提供实验依据.方法 37%磷酸酸蚀处理牙本质片0(空白对照组)、10、15、30、60 s,酶联免疫吸附法定量测定Ⅰ型胶原的降解量,场发射扫描电镜(field emission in-lens scanning electron microscope,FEISEM)观察胶原纤维的形态学变化.结果 酸蚀处理60 s时Ⅰ型胶原的降解量最多,为4.86(1.55)mg/g;其次为30 s组,为2.76(0.87)mg/g;再次为15 s组,为1.93(0.88)mg/g;10 s组胶原降解量较少,为0.95(0.38)mg/g;空白对照组胶原的降解量最少,为0.06(0.03)mg/g.两两比较显示,各组间差异均有统计学意义(P＜0.005).FEISEM显示,37%磷酸处理牙本质表面10 s,尽管已清除了玷污层,但牙本质小管口以及胶原纤维仍覆盖颗粒样物质.酸蚀15 s牙本质小管口开放,暴露清晰.酸蚀30 s暴露的胶原纤维表面比15 s组光滑,球状附着物减少;酸蚀60 s牙本质小管内主纤维数最减少,管内结构塌陷,次级纤维数量增加,存在纤维断裂的征象.结论 在实验时间0～60 s内,酸蚀15 s即可达到酸蚀目的 ,延长酸蚀时间,可引起更多的胶原纤维变性降解。

目的 利用薄片推出实验检测脱水及再湿润过程中纤维桩与根管各区段的粘接强度及粘接耐久性,以期为临床桩核修复提供实验依据.方法 将36颗离体牙用随机数字表均分为过干燥组、再湿润组及对照组,分别进行纤维桩粘接,将牙根横向切割为1.0 mm厚的切片,每颗牙选取根颈部、根中部和根尖部各2个切片,即刻及水储存2个月后进行薄片推出实验,并对破坏试件进行扫描电镜观察.结果 过干燥组、再湿润组和对照组纤维桩即刻实验的粘接强度分别为(5.97±1.97)、(7.67±2.19)和(8.46±2.35)MPa;水储存2个月后粘接强度分别为(2.08±1.67)、(2.99±1.48)、(3.22±1.43)MPa.即刻实验和水储存2个月后,过干燥组与再湿润组、过干燥组与对照组间差异均有统计学意义(P＜0.05).根颈段牙本质比根管其他区段能提供更大的粘接强度(P＜0.05);水储存对纤维桩粘接强度有显著影响(P＜0.05).结论 根管过度吹干处理可影响纤维桩的粘接强度及粘接耐久性.水灌注可使过干燥管壁牙本质重新恢复湿润状态,恢复纤维桩正常的粘接强度及粘接耐久性。

目的 探讨在一定机械压应力条件下人牙周膜成纤维细胞常见炎症相关细胞因子的表达谱变化,初步明确机械压应力对牙周膜成纤维细胞炎症相关细胞因子表达的影响.方法 取健康恒前磨牙牙根中1/3牙周膜组织,采用组织块法培养人牙周膜成纤维细胞,分为加压组(200 Pa持续加压)与未加压组培养24 h后,通过反转录聚合酶链反应(RT-PCR)及实时定量PCR法检测白细胞介素(IL)-1β、IL-2、IL-4、IL-6、IL-8、IL-10、IL-12、肿瘤坏死因子(TNF)-α、TNF-β、干扰素(interferon,IFN)-γ的mRNA表达量并与管家基因磷酸甘油醛脱氢酶进行对比.加压组与未加压组培养48 h后通过微球流式多因子方法检测上述细胞因子蛋白水平的表达量.结果 加压组人牙周膜成纤维细胞培养24 h后细胞中IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α、TNF-β及IFN-γ mRNA相对表达量(分别为0.3633±0.0874、0.4200±0.0285、0.1697±0.0284、0.0983±0.0131、0.2840±0.0676及3.1067±0.2857)显著高于未加压组(分别为0.1173±0.0176、0.1691±0.0174、0.0117±0.0021、0.0243±0.0050、0.0000±0.0000及0.1433±0.0125),P＜0.05;加压组人牙周膜成纤维细胞培养48 h后细胞培养上清液中IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α、TNF-β及IFN-γ的蛋白表达量[分别为(18.21±1.01)、(1634.11±472.41)、(1461.47±50.53)、(20.71±2.52)、(884.11±118.86)以及(1461.47±333.37)ng/L也显著高于未加压组[分别为(5.32±4.97)、(373.56±155.92)、(679.11±141.42)、(4.32±0.73)、(3.56±0.92)及(204.11±35.36)ng/L],P＜0.05;IL-2、IL-4、IL-5、IL-10及IL-12的mRNA相对表达量及蛋白表达在两组中差异无统计学意义(P＞0.05).结论 人牙周膜成纤维细胞在持续机械压应力作用下可显著上调IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α、TNF-β、IFN-γ等炎症相关细胞因子mRNA及蛋白水平的表达,从而进一步影响局部牙周组织微环境。

目的 通过比较比色板比色和全牙测色比色仪测色的准确入次,并分析比色仪测色结果与内置色度值的色差,评价全牙测色比色仪测色的准确性.方法 20名口腔修复专业医师用Vita 3D-Master比色板以及训练前后用Crystaleye全牙测色比色仪对固定在标准牙列模型上的8个比色片中央区分别进行比色板比色和比色仪测色,记录比色结果,计算比色板比色准确率和训练前后比色仪测色准确率.结果 20名受试对象比色板比色的准确率为49%,训练前后比色仪测色的准确率分别为83%、99%.结论 全牙测色比色仪的测色准确性明显高于比色板比色,掌握正确的测色方法后可以进一步提高测色准确性。