2024年 · 第59卷第05期

口腔颅颌面系统是包含多种组织的复杂综合性系统，具有独特的生物学特征，并赋予个体形貌，口腔颅颌面系统组织缺损后的再生具有重要意义，也是当前口腔医学领域的一项重大挑战。本文回顾口腔颅颌面系统组织再生领域的研究历程，总结当前研究的现状和面临的问题，聚焦口腔颅颌面系统间充质干细胞在组织再生中的关键作用，并对未来该领域的发展进行探讨和展望，旨在增进口腔医学工作者对本领域的了解，并为口腔颅颌面系统组织再生领域的创新性治疗方法和临床实践提供可能的方向。

间充质干细胞在基因以及微环境的时空调控下可自发聚集形成致密化区域，这一现象称为间充质凝聚。间充质凝聚是跨物种保守的发育事件，对启动牙及全身器官的形态发生至关重要。间充质干细胞在培养中也具有自组装聚集能力，利用此特性构建干细胞聚合体以模拟发育性间充质凝聚已成为一种具有应用前景的再生医学手段。本文讨论间充质凝聚的原理及其在牙形态发生中的作用与机制，并总结干细胞聚合体的工程化构建策略及应用于牙再生领域的实践经验，旨在从“发育指导再生”的理念出发，为理解干细胞发育生物学和建立新的器官再生策略提供参考。

口腔颅颌面硬组织主要包括颅颌面骨及牙齿组织，是口腔颅颌面系统的重要组成部分。发育畸形、肿瘤、外伤等疾病可造成颅颌面硬组织大面积缺损，严重损害患者面部形貌与功能，影响患者生活质量与身心健康。组蛋白乙酰化修饰是研究最早、最广的组蛋白修饰方式，是由组蛋白乙酰转移酶和组蛋白去乙酰化酶共同调控的表观遗传修饰机制。本文对组蛋白乙酰转移酶和组蛋白去乙酰化酶介导的组蛋白乙酰化修饰在颅颌面硬组织发育与再生修复中的研究现状进行评述，以期为颅颌面硬组织发育缺陷以及缺损的再生修复提供新线索。

目的 探讨肝组织细胞外囊泡（LT-EV）促进间充质干细胞成骨分化并治疗小鼠颌骨缺损的生物学过程，以期为临床颌骨缺损治疗提供一种可行的治疗方式。 方法 使用酶解法和差速离心法提取小鼠LT-EV，使用扫描电镜、蛋白质印迹法和纳米粒子跟踪分析仪鉴定和表征LT-EV，并通过蛋白质组学、京都基因和基因组数据库通路分析进一步探索LT-EV的生物学功能。使用流式细胞术检测LT-EV血浆浓度，计算LT-EV的血浆半衰期。使用小动物活体成像系统检测小鼠注射LT-EV 24 h后的生物学分布。通过简单随机抽样法将6只C57BL/6小鼠分为对照组和LT-EV组（每组3只），所有小鼠行颌骨缺损手术，每7天行尾静脉注射（对照组注射磷酸盐缓冲液，LT-EV组注射LT-EV），术后28 d使用显微CT检测小鼠颌骨愈合程度，通过HE染色分析LT-EV的多器官生物安全性，使用免疫荧光染色检测颌骨缺损区域成骨标志蛋白表达量。采用LT-EV处理成骨分化诱导的人颌骨间充质干细胞（hJBMSC）（取自第四军医大学口腔医院创伤与正颌外科提供的正颌手术患者手术切除的正常颌骨骨片），并比较hJBMSC组与对照组（磷酸盐缓冲液处理）细胞成骨分化能力差异，通过碱性磷酸酶（ALP）染色和实时荧光定量PCR验证LT-EV的体外促成骨分化作用。 结果 LT-EV产量较高，蛋白组学与京都基因和基因组数据库通路分析显示，LT-EV含有调节细胞生物功能的系列蛋白质。尾静脉注射的LT-EV可到达小鼠颌骨缺损区域，并促进颌骨缺损的再生修复［LT-EV组和对照组骨体积分数分别为（36.06±4.20）%和（18.58±5.61）%；t=4.32，P=0.013］，且具有良好的生物安全性。LT-EV在体外可以促进hJBMSC成骨分化，相比对照组，hJBMSC组成骨分化后ALP染色和成骨基因表达水平均显著增强（P<0.05）。 结论 LT-EV产量大、易获取、生物安全性高并具备优良的促成骨作用，有望成为颅颌面骨骼缺损再生的无细胞疗法新策略。

目的 探讨间断清除衰老细胞对规模化长期培养中牙髓干细胞（DPSC）增殖和分化功能的影响，探索维持体外培养DPSC年轻状态的方法。 方法 从四川大学华西口腔医院口腔颌面外科提供的因正畸或阻生拔除的健康恒牙中提取人DPSC，模拟DPSC体外规模化长期培养过程，并对年轻DPSC（第5代，P5）、衰老DPSC（第25代，P25）进行细胞衰老β-半乳糖苷酶染色、集落形成实验、成骨分化诱导茜素染色实验。利用细胞衰老β-半乳糖苷酶染色比较5种衰老清除药物［那维克拉（ABT-263）、姜黄素、达沙替尼、非瑟酮、槲皮素］的清除效率，选择清除效率最高的药物进行后续实验。选取衰老细胞占比开始显著增多的代数，给予间隔3代、累计3次的衰老清除药物处理，对对照组和药物处理组细胞进行荧光细胞衰老β-半乳糖苷酶染色、实时荧光定量PCR（RT-qPCR）、集落形成实验、细胞划痕实验、成骨诱导茜素红染色实验。体内验证使用裸鼠皮下异位成骨实验，对移植物进行HE染色、免疫组织化学染色。 结果 衰老细胞占比随培养周期延长而增加，相比年轻DPSC，衰老DPSC的增殖和成骨分化能力显著减退（P<0.05）。与年轻DPSC相比，衰老DPSC衰老相关蛋白p21、p16INK4a、白细胞介素6（IL-6）mRNA及增殖相关蛋白Ki67 mRNA表达量均发生显著改变（P<0.001）。5种衰老清除药物中，ABT-263衰老细胞占比最少。培养过程中间断使用ABT-263后，药物处理组衰老细胞占比［（6.72±2.34）%］显著小于对照组［（31.82±0.57）%］（P<0.001）；RT-qPCR证实，药物处理组p21、p16INK4a、IL-6 mRNA表达量均显著小于对照组（P<0.05），Ki67 mRNA表达量显著大于对照组（P<0.01）。药物处理组的细胞愈合能力、成骨分化能力均显著大于对照组（P<0.05）。体内实验结果显示，药物处理组DPSC的移植体内后相对新生骨质面积［（2.36±0.48）%］显著大于对照组［（1.00±0.46）%］（P<0.05）。 结论 ABT-263可有效清除规模化长期培养DPSC的衰老细胞，培养过程中不断给予的ABT-263处理可维持规模化长期培养DPSC的体内及体外增殖、分化功能。

目的 研究原花青素（PA）调节人牙周膜干细胞（PDLSCs）成骨分化的具体机制，探讨PA对转录因子EB（TFEB）的表达和自噬-溶酶体途径的影响。 方法 将PDLSCs分为对照组和PA组，通过转录组测序（RNA Seq）分析差异表达基因，通过实时荧光定量PCR（RT-qPCR）、碱性磷酸酶（ALP）染色和透射电子显微镜（TEM）观察细胞成骨能力和自噬水平。通过划痕实验和Trasnwell实验检测PDLSCs的迁移能力，溶酶体荧光探针（Lysotracker）染色和免疫荧光染色检测溶酶体的生物发生，蛋白质印迹法检测TFEB总蛋白及其在细胞质和细胞核中的表达，激光扫描共聚焦显微镜（CLSM）观察TFEB的核易位。使用小干扰RNA（siRNA）技术敲低TFEB基因，进行PA处理或无处理。蛋白质印迹法检测细胞中自噬标志物苄氯素1（Beclin1）、微管相关蛋白1轻链3B（LC3B）和成骨标志物Runt相关转录因子2（RUNX2）、ALP和骨钙素的表达。 结果 与对照组相比，PA组中PDLSCs的成骨和自噬相关基因出现差异性表达（P<0.05）。PA组中成骨相关基因RUNX2（2.32±0.15）、Ⅰ型胶原蛋白ɑ1链（COL1α1）（1.80±0.18）和自噬相关基因LC3B（1.87±0.08）、Beclin1（1.63±0.08）的mRNA表达水平均显著高于对照组（分别为1.01±0.16、1.00±0.10、1.00±0.07、1.00±0.06）（均P<0.01）。与对照组相比，PA组的ALP活性更高，TEM镜下自噬体和自噬溶酶体数目更多。PA显著促进了PDLSCs的迁移（P<0.05），并增加了溶酶体的数量和溶酶体相关膜蛋白1（LAMP1）的表达。PA组中TFEB总蛋白的相对表达水平（1.49±0.07）和TFEB在细胞核/细胞质中的相对表达水平（1.52±0.12）均显著高于对照组（分别为1.00±0.11、1.00±0.13）（均P<0.01）。PA组TFEB的细胞核/细胞质相对荧光强度（0.79±0.09）也显著高于对照组（0.11±0.08）（t=8.32，P<0.01）。敲低TFEB后，PDLSCs中TFEB（0.64±0.04）、LAMP1（0.69±0.09）、Beclin1（0.60±0.05）和LC3B Ⅱ/Ⅰ（0.73±0.07）蛋白的表达均显著低于阴性对照组（分别为1.00±0.15、1.00±0.10、1.00±0.05、1.00±0.06）（P<0.05，P<0.05，P<0.01，P<0.01）。敲低TFEB后PA组中Beclin1（1.05±0.11）、LC3B Ⅱ/Ⅰ（1.02±0.09）、RUNX2（1.04±0.10）、ALP（1.04±0.16）和骨钙素（1.03±0.15）的表达均显著低于敲低前（分别为1.28±0.03、1.44±0.11、1.38±0.11、1.62±0.11、1.65±0.17）（P<0.05，P<0.01，P<0.05，P<0.01，P<0.01）。 结论 PA通过促进PDLSCs中TFEB的表达和核易位，激活自噬-溶酶体途径，促进PDLSCs的成骨分化。

目的 探讨口腔微生物与再生医学领域相关文献趋势、研究热点和发展方向，为该领域研究者提供有价值的参考和方向。 方法 利用Web of Science核心合集数据库检索2014—2023年间口腔微生物与再生医学领域相关文献，应用CiteSpace 6.2.R6软件进行数据处理与分析。通过设置时间切片、选择节点类型选择和应用g指数（g-index）进行筛选，对国家、机构、作者、期刊和关键词进行分析。 结果 2014—2023年期间口腔微生物与再生医学领域文献总量稳步增长，2020年发文量首次突破百篇，到2022年达到134篇，且被引频次高达3 363次。中国和美国的发文量处于前列，但美国和德国文献的中介中心性领先。相关研究主要分布学科领域以口腔医学、交叉学科、材料学和免疫学为主，干细胞、支架材料、肠道微生物为高频关键词，而聚类分析提示炎症、药物递送和抗菌活性为持续的研究主题。近年来，“组织再生”“肠道微生物”和“颌面部手术”的研究热度上升，预示这些内容可能成为未来研究的重点方向。 结论 近10年来，关于口腔微生物与再生医学领域的文献发文量及其引用频次逐年上升，研究热点随时间推移发生变化。理解口腔微生物与肠道微生物之间的交互作用，对开发新的再生治疗策略具有重要意义。

目的 探讨种植体周炎患者种植体周探诊深度（PPD）与影像学骨水平（rBL）的相关性。 方法 纳入2019年1月至2022年12月于北京大学口腔医学院·口腔医院牙周科就诊的种植体周炎患者24例，涉及患病种植体30枚，另从2007 年1月至2023年6月在北京大学口腔医学院·口腔医院牙周科有电子检查记录的种植体中，使用SPSS26.0软件进行简单随机抽样选取30枚健康种植体作为对照。在保留种植修复体的前提下，使用Williams牙周探针以轻力（约0.2 N）测量PPD（种植体袋底到黏膜边缘的距离），记录各种植体颊侧、舌侧、近中及远中共4个位点的PPD。应用根尖片测量健康种植体近远中影像学骨水平（rBL，种植体颈部参考点与骨缺损最根方位点之间的距离），应用根尖片和锥形束CT分别测量种植体周炎种植体近远中及颊舌侧rBL及骨缺损宽度（DW），并记录骨缺损类型。应用χ2检验、Spearman检验和Logistic回归分析PPD与rBL的相关性及临床探诊诊断与影像学诊断的一致性。 结果 30枚健康种植体的近中、远中共60个位点和30枚种植体周炎种植体近中、远中、颊侧、舌侧共120个位点，共计180个位点的PPD与rBL显著正相关（r=0.64，P<0.001）。χ2检验显示种植体周炎种植体中，rBL≥1 mm与PD≥6 mm显著相关［优势比（OR）=8.15，P<0.001］。多因素Logistic回归分析显示，在校正种植体颌位和检查位置后，rBL与PPD仍然存在统计学关联，以rBL<1 mm为参照，rBL≥1 mm且<2 mm组、rBL≥2 mm且<3 mm组及rBL≥3 mm组与PPD间的OR值分别为6.23（P=0.014）、2.77（P=0.183）和10.87（P=0.001）。 结论 种植体周炎种植体的PPD与 rBL呈显著正相关，在保留修复体的前提下，PPD可作为辅助判断种植体周骨水平的临床检查指标。

目的 分析唾液腺伴胸腺样分化的癌（CASTLE）临床病理特点。 方法 收集并筛选上海交通大学医学院附属第九人民医院口腔病理科2020年1月至2023年12月期间满足唾液腺CASTLE诊断的病例。共收集7例患者，其中男性3例，女性4例，年龄11~70岁。分析患者的临床表现、镜下表现、免疫组化、预后等特点。 结果 7例唾液腺CASTLE均位于腮腺；病史1个月~1年，1例患者伴有面部麻木，1例偶有肿胀感；影像学上，4例考虑恶性肿瘤或恶性肿瘤待排。显微镜下，4例肿瘤累及周围腺体组织，所有肿瘤具有多少不一的淋巴组织背景，肿瘤细胞排列呈巢状，其中5例呈淋巴上皮癌样，2例呈鳞状细胞癌图像；淋巴上皮癌样肿瘤细胞除表达CD5外，还可表达CD117，呈鳞状细胞癌图像的病例局灶或部分表达CD117；所有病例均无EB病毒感染。6例有随访信息的患者均行术后放疗，均未见肿瘤复发及转移。 结论 唾液腺CASTLE是一种少见的肿瘤，需与淋巴上皮癌和鳞状细胞癌鉴别，患者预后尚好，CD5在鉴别诊断中具有较大价值。

目的 通过体内外模型观察牙周炎局部组织内皮细胞在炎症环境下是否发生焦亡，为探究牙周炎发病机制提供实验依据。 方法 根据牙周病2018年新分类标准收集无全身疾病、牙周健康者及Ⅲ~Ⅳ期C级牙周炎患者的牙龈组织，免疫组化染色检测牙龈组织中焦亡标志性蛋白消皮素D（GSDMD）的表达水平及分布情况；每组通过结扎3只小鼠上颌第二磨牙2周建立牙周炎模型（结扎组），使用显微CT（micro-CT）检测小鼠牙槽骨吸收情况（以不做结扎处理的小鼠作为对照组）；使用免疫荧光染色对健康及炎症小鼠牙龈组织中血管内皮细胞血小板内皮细胞黏附分子（CD31）与GSDMD共定位进行定量分析；体外培养人脐静脉内皮细胞（HUVECs），分别以质量浓度为0.5、1.0、2.5、5.0、10.0 mg/L牙龈卟啉单胞菌（Pg）脂多糖（LPS）联合腺苷三磷酸（ATP）处理HUVECs，同期设置0 mg/L Pg-LPS组为对照组。使用扫描电镜观察 HUVECs形态，蛋白质印迹法检测GSDMD的N端结构域（GSDMD-N）蛋白表达，细胞免疫荧光染色检测GSDMD蛋白表达及分布，细胞计数试剂盒（CCK-8）检测HUVECs的增殖能力，碘化丙啶（PI）染色检测HUVECs细胞膜的完整性。 结果 免疫组化结果显示，牙周炎患者牙龈组织中GSDMD主要分布于血管周围，且表达水平较健康组织显著升高；micro-CT结果显示，结扎组小鼠上颌第二磨牙周围牙槽骨吸收较对照组小鼠显著增多（t=8.88，P<0.001）；免疫荧光染色结果显示，结扎组小鼠牙龈组织中血管内皮细胞GSDMD与CD31存在明显的共定位；扫描电镜结果显示，在不同浓度Pg-LPS联合ATP模拟的炎症环境中，HUVECs细胞膜上出现不同大小的孔洞，呈现典型的细胞焦亡形态，其中2.5 mg/L Pg-LPS+ATP组细胞膜上孔洞最多且扩张融合，细胞有裂解死亡的趋势。蛋白质印迹法结果显示，2.5和5.0 mg/L Pg-LPS+ATP组焦亡标志性蛋白GSDMD-N表达显著高于对照组（F=3.86，P<0.01）；细胞免疫荧光结果显示，2.5 mg/L Pg-LPS+ATP组较对照组GSDMD平均荧光强度升高最显著（F=35.25，P<0.001）。CCK-8结果显示，0.5、1.0、2.5、5.0和10.0 mg/L Pg-LPS+ATP组细胞增殖相对值（分别为0.52±0.07、0.57±0.10、0.58±0.04、0.55±0.04和0.61±0.03）均显著低于对照组（1.00±0.02）（F=39.95，P<0.001）。PI染色结果显示，PI阳性细胞数占比在2.5 mg/L Pg-LPS+ATP组最高［（56.07±3.22）%］（F=88.24，P<0.001）。 结论 牙周炎症环境中内皮细胞发生明显的焦亡现象，提示内皮细胞焦亡可能是造成牙周炎发生的重要致病因素。

获得正常形态结构和功能的牙髓、牙本质和牙周再生一直是牙再生领域的研究热点。目前，以牙髓干细胞为种子细胞的组织工程与再生技术已初步实现类牙组织再生。如何提高再生的有效性和稳定性成为亟待解决的问题。单细胞转录组测序和类器官培养技术的发展，为进一步实现精准、靶向和可控的功能性牙再生提供了可能。本文综述牙髓干细胞在牙再生中的研究进展，归纳牙髓干细胞基本特性并浅析研究热点，为实现稳定高效的牙再生提供新的研究方向和转化应用思路。

甲基化修饰是真核生物中最常见的表观修饰调控，包括组蛋白甲基化、DNA甲基化、RNA甲基化等，在生理和病理过程中发挥重要的调控作用。牙根发育由上皮和间充质细胞共同完成，涉及多种细胞与分子的相互作用。近年大量研究显示，甲基化修饰对牙根发育发挥关键调控作用，这逐渐拓展了牙根发育的调控机制网络。本文综述牙根发育过程中甲基化修饰的作用和机制研究新进展，以期为牙根缺失或短根畸形诊治提供新的理论基础。

骨窗技术是指在病变表面完整的骨板上进行切割以形成骨窗和游离骨块，从而获得手术入路，并在手术最后阶段将脱位的骨块重新放置到原位的手术方法。在显微根尖手术中应用此技术有改善手术视野和可操作性、减少术后骨缺损、促进病变区域骨愈合、维持颌骨轮廓完整性等优势。在手术过程中，准确定位和制备骨窗是进行后续操作的重要前提，但在术区位置靠后或病变表面骨皮质厚而完整等情况下完成此步骤较困难，同时游离骨块复位后能否稳定在原位也与手术预后密切相关，数字化导航技术和骨腔填塞材料的辅助应用可能有助于改进骨窗技术，为疑难病例患牙的保留提供更多可能。

区域性牙发育不良（ROD）是一种罕见的局部牙齿发育异常，临床典型症状为牙齿萌出异常，牙釉质和牙本质发育障碍，影像学表现为“鬼影牙”。ROD病因尚未明确，临床上应根据病例情况制订个性化诊疗方案，进行口腔多学科综合协作的序列治疗。本文详述了ROD的定义、病因、流行病学特点、临床表现、影像学表现、牙齿微观结构和治疗等，以期为临床诊疗提供参考。

即刻种植可减少治疗次数，缩短缺牙时间，但具有较高的美学风险。软组织移植可一定程度减少牙龈退缩风险，提高即刻种植美学效果的可预期性和长期稳定性，是目前研究的热点。全面了解即刻种植手术中使用软组织移植的循证依据和手术方法，能辅助临床诊疗决策和提高治疗效果。本文阐述即刻种植后的软硬组织变化、美学风险及危险因素，对即刻种植中软组织移植的优势、时机、材料选择和常用临床术式进行阐述，以期为临床医师提高即刻种植的效果提供参考。

随着医学模式由传统的生物医学模式向社会-心理-生物医学模式转变，口腔操作的舒适化、无痛化、微创化和可视化成为现代医学发展的趋势和要求，人们对舒适化口腔治疗的需求也越来越高。牙周基础治疗操作中常伴随着疼痛，患者对疼痛的反应从紧张到牙科恐惧症不等，可出现烦躁不安、过度换气甚至恶心呕吐、拒绝合作等表现，使治疗的实施变得困难甚至无法实施。本文从治疗前诊室布置、患者信任的获取和预防性镇静的实施，治疗过程中的舒适化操作及护理、心理干预措施、局部麻醉和镇静技术的使用，以及治疗后的健康教育和随访等方面，阐述如何一步一步做好舒适化牙周基础治疗。