2003年 · 第39卷第07期

目的 确定人晶状体上皮细胞（HLEC）系LEC-B3细胞内两种钙池调控系统肌醇1，4，5-三磷酸（IP3）受体和兰尼碱受体的表达，并鉴定其亚型，初步探讨两系统对HLEC内Ca2+的调控作用。 方法 传代培养HLEC系LEC-B3细胞，选用第3代融合状态良好的细胞，提取细胞总RNA，反转录获取cDNA，分别用IP3受体的Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ亚型和兰尼碱受体的Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ亚型特异引物进行逆转录聚合酶链反应，判定分析mRNA的表达。并在激光扫描共聚焦显微镜下分别采用一定浓度的乙酰胆碱、阿托品、咖啡因、兰尼碱及普鲁卡因作用于细胞外液含Ca2+、Mg2+和不含Ca2+、Mg2+的同代细胞，观察分析Ca2+信号的变化。 结果 HLEC系LEC-B3细胞中分别表达IP3受体和兰尼碱受体的Ⅰ和Ⅲ型mRNA，且均Ⅲ型表达强于Ⅰ型（P＜0.05）。10μmol/L乙酰胆碱、10mmol/L咖啡因及50μmol/L兰尼碱均可使细胞内Ca2+浓度增高，而波动的开始时间、幅度及持续时间因细胞外液成分和药物不同而异；1μmol/L阿托品可阻断乙酰胆碱的作用，50μmol/L普鲁卡因可抑制兰尼碱的作用。 结论 HLEC系LEC-B3细胞内同时存在IP3受体和兰尼碱受体基因的转录，且存在亚型特异性。两种受体的激动剂和抑制剂均可引起细胞内Ca2+浓度的变化，提示IP3受体和兰尼碱受体系统在HLEC内Ca2+浓度的调控中同时发挥重要作用，其中IP3受体对Ca2+更为敏感。

目的 观察体外培养的小鼠晶状体上皮细胞（LEC）内同源盒基因Pax-6的表达，探讨维持晶状体上皮细胞特性的基因因素。 方法 体外培养小鼠原代、传1代、传2代及传3代LEC，利用免疫组织化学法和免疫印迹法，检测细胞中Pax-6基因的蛋白表达情况，利用逆转录聚合酶链反应法检测细胞中Pax-6基因的mRNA表达情况。 结果 在原代、传1代及传2代培养的LEC中均可检测到Pax-6基因蛋白和mRNA的阳性表达，传3代培养的LEC中仅检测到Pax-6基因蛋白的微弱表达。阴性对照均未见Pax-6基因的表达。 结论 体外培养的小鼠LEC中具有Pax-6基因，该基因的正常表达是维持LEC特性的必要条件。

目的 探讨钙蛋白酶抑制剂PD150606对鼠氧化性白内障的预防作用和钙蛋白酶在H2O2诱发白内障鼠的晶状体上皮细胞（LEC）凋亡过程中的作用。 方法 将健康清洁级SD大鼠的120只离体透明晶状体随机均分为2组，实验组加含2mmol/L H2O2和0.1mmol/L PD150606的培养液，对照组加含2mmol/L H2O2的培养液。于6、12、24h，分别检测2组鼠晶状体的透明度及相对灰度值；微量Folin酚法检测2组晶状体蛋白质中水溶性蛋白（WSP）所占比例；流式细胞仪术检测2组晶状体中LEC数目；蛋白电泳结合免疫印迹法检测LEC中天冬氨酸特异的半胱氨酸蛋白酶3的表达。 结果 加入培养液后24h内，实验组晶状体混浊程度较对照组明显好转。6、12及24h，实验组晶状体相对灰度值增大，与对照组比较，差异有显著意义（t=2.285, 4.834, 5.737；均P＜0.05）；12和24h，实验组WSP在晶状体蛋白质中所占比例下降程度有所减小，与对照组比较，差异均有非常显著意义（t=1.398, 3.260, 3.260；均P=0.009）；加入培养液后6、12及24h，实验组LEC凋亡数目减少，与对照组比较，差异均有非常显著意义（t=6.268, 5.759, 5.397；均P＜0.01）；6、12及24h，实验组半胱氨酸蛋白酶-3的表达减弱，与对照组比较，差异有非常显著意义（t=11.637, 5.648, 6.369；均P＜0.01）。 结论 钙蛋白酶抑制剂PD150606可部分抑制H2O2诱发的离体鼠晶状体混浊、蛋白水解及LEC凋亡，钙蛋白酶的激活在氧化性白内障的发生中有一定作用。钙蛋白酶可能通过水解晶状体蛋白和激活半胱氨酸蛋白酶3诱导LEC凋亡，以诱发白内障。

目的 探讨肝素缓释系统抑制后发性白内障发生的可行性和有效性。 方法 将30只（30只眼）超声乳化透明晶状体吸除术后新西兰大白兔随机均分为A组（术后生理盐水滴眼）、B组（术中后房内植入空白缓释系统）及C组（术中后房内植入肝素缓释系统）。术后12周对3个组兔眼进行裂隙灯显微镜、组织病理学及电镜检查，并检测血、房水肝素浓度和晶状体后囊膜的湿重。 结果 （1）术后12周A、B及C组发生晶状体后囊膜混浊的眼数分别为10、10及4只眼，差异有非常显著意义（χ2=14.09, P=0.001）。（2）术后12周A、B及C组晶状体后囊膜的平均湿重分别为（158±5）、（160±9）及（20±3）mg，差异有非常显著意义（F=1168.99, P=0.000）。（3）C组房水中的平均肝素浓度为（26±12）mg/L。（4）光镜和电镜下C组兔眼晶状体后囊膜细胞增殖不活跃，未发现眼内毒性反应。（5）术中和术后无眼内出血现象。 结论 后房内植入肝素缓释系统，可明显提高并长期维持房水中的肝素浓度，有效抑制后发性白内障的发生；该方法毒副作用小，是一种安全、有效的给药方式。

目的 探讨基质金属蛋白酶2（matrix metalloproteinase-2, MMP-2）、金属蛋白酶2组织抑制因子（tissue inhibitor of metalloproteinase 2, TIMP-2）及转化生长因子β1（transforming growth foctor beta, TGF-β1）在糖尿病性白内障患者的晶状体上皮细胞中的表达及意义。 方法 应用免疫组化技术检测23例糖尿病性白内障患者和7例正常人的晶状体上皮细胞中MMP-2、TIMP-2及TGF-β1的表达，并进行比较。 结果 糖尿病性白内障患者晶状体上皮细胞中MMP-2和TGF-β1的阳性表达率与正常人比较，差异均有非常显著意义（χ2=24.548，16.78；P＜0.01），而糖尿病性白内障患者晶状体上皮细胞中TIMP-2的阳性表达率与正常人比较，差异无显著意义（χ2=0.621, P＞0.05）。经Spearman等级相关分析，晶状体上皮细胞中，MMP-2和TGF-β1的阳性表达率存在正相关（r=0.516, P＜0.01）；MMP-2和TGF-β1与TIMP-2阳性表达率间均无相关（r=-0.045，0.042；P＞0.05）。 结论 TGF-β1介导的MMP-2和TIMP-2表达失衡在糖尿病性白内障患者晶状体前、后囊膜下纤维化的发生和发展过程中起重要作用。

目的 了解年龄相关性黄斑变性（AMD）合并脉络膜新生血管患者的自然病程和视力预后。 方法 对29例（35只眼）未接受激光、放射或手术等治疗的湿性AMD患者，进行全面眼部检查和有计划的定期随诊，包括视力、眼前节检查，直接和间接检眼镜检测，在裂隙灯下用+90D前置镜检查眼底，眼底照相和荧光素眼底血管造影等。 结果 随诊5~16年（平均8年），最佳矫正视力在0.1以下者，初诊时为10只眼（眼前手动4只眼），占28.5%；末诊时为23只眼（眼前手动14只眼），占65.7%。初诊时黄斑出血25只眼，玻璃体积血4只眼，随诊中有23只眼反复出血，最多达4次。末诊时仍有7只眼黄斑出血。初诊时7只眼存在黄斑区机化膜，末诊时35只眼均有面积大小不等的机化膜形成。 结论 经过长期观察，AMD合并脉络膜新生血管患者的自然病程漫长，黄斑区反复出血，视力预后恶劣。

目的 探讨挫伤性玻璃体积血的手术时机与效果。 方法 对116例（116只眼）挫伤性玻璃体积血患者分别采用药物治疗46例（46只眼）和玻璃体手术治疗70例（70只眼），并对结果进行比较性研究和随诊观察。 结果 玻璃体手术组患者术后1个月，视力≥0.1者为71.4%；而非手术组患者药物治疗后1个月，视力≥0.1者仅为21.7%，两者差异有显著意义（P＜0.05）。非手术组患者治疗后视力＞0.1者10只眼，其中7只眼是于受伤后2周内恢复视力。手术组患者中，仅有27.1%的患眼做单纯玻璃体切除术，70.9%的患眼行玻璃体切除联合其他术式；术后有3只眼发生视网膜脱离，经再手术治愈。非手术组患者治疗过程中，有14只眼发生视网膜脱离，11只眼接受手术治疗，8只眼治愈。 结论 挫伤性玻璃体积血药物治疗观察的时间为伤后2~3周，若无明显好转应及时选择玻璃体手术治疗。

目的 研究重庆市角膜捐献人群的现状。 方法 2001年5~12月抽样调查1400位重庆市市民对角膜捐献的意识和态度、有关角膜捐献知识了解的程度及实际角膜捐献的参与性，并对其进行分析；1999年3月至2001年12月对1278位身后捐献角膜志愿者的社会学资料进行分析和回访；1999年5月至2001年12月对37位已经捐献眼球者社会学及相关医学资料进行分析。 结果 （1）问卷调查结果：1400份调查问卷中，回收问卷1108份（79.14%），有效问卷1072份（76.57%）。其中506份（47.20%）愿意身后捐献角膜，672份（62.69%）支持捐献角膜，701份（65.39%）不知道重庆市已经建立了眼库，984份（91.79%）不知道如何办理角膜捐献手续，807份（75.28%）赞成尽快立法或制定地方性条例。1010份自愿角膜捐献者的问卷中，332份（32.55%）表示只捐献角膜；967份愿意身后捐献角膜或器官问卷中，875份（90.49%）不愿意现在即办理捐献手续。（2）1278位角膜捐献志愿者：男性550人，女性728人。791人（61.89%）年龄≤30岁。学生、教师、医务人员、企事业单位干部及文职人员共937人（73.16%），其中大专以上文化程度824人（64.48%）。（3）37例已捐献眼球者：年龄20~88岁，多数因恶性肿瘤及心、脑血管疾病而致死；初中以下文化程度者22人（59%），大专以上者4人（11%）；捐献的角膜临床应用率为73%。 结论 （1）重庆市已存在相当数量角膜志愿捐献的人群，年龄、文化程度不是角膜捐献意识和行为的决定因素；（2）实际角膜捐献率较低；（3）加快角膜捐献立法的进程。

目的 观察重组腺病毒rAd-gfp-bcl-XL治疗视网膜变性（retinal degeneration, RD）鼠的疗效。 方法 40只RD鼠随机分成A、B组，每组20只，右眼为治疗眼，左眼为对照眼。A、B组治疗眼分别于RD鼠生后10d及22d视网膜下腔注射含绿色荧光蛋白基因gfp和抗凋亡基因bcl-XL的重组腺病毒颗粒；术后15、30d摘除治疗眼和对照眼行冰冻切片、透射电镜下观察、石蜡切片、HE染色并提取视网膜总RNA；行逆转录聚合酶链反应分析bcl-XL基因的mRNA表达水平；免疫组化分析治疗眼和对照眼的Bcl-XL蛋白水平。 结果 治疗眼视网膜有较广泛的绿色荧光蛋白表达，说明重组腺病毒成功的将bcl-XL转染至视网膜光感受器细胞，且有bcl-XL表达；术后30d，A组鼠治疗眼和对照眼bcl-XL的mRNA表达水平及Bcl-XL蛋白含量有明显差异；透射电镜下可见治疗眼的内节段较对照眼完好；HE染色示治疗眼视网膜光感受器细胞层较对照眼厚。而B组鼠治疗眼和对照眼的视网膜光感受器细胞层的厚度无明显差异。 结论 注射至早期RD鼠视网膜下腔中的rAd-gfp-bcl-XL能有效转染光感受器细胞并发挥抗凋亡作用，但对晚期RD鼠的疗效不明显。

目的 研究严重急性呼吸综合征（SARS）患者淋巴细胞及其亚群的表型变化，以期为SARS的诊断治疗提供新的监测指标。 方法 采用多色流式细胞术结合血液分析仪测定38例SARS患者外周血淋巴细胞及其亚群的表达情况。 结果 84%的患者淋巴细胞绝对计数降低。各类淋巴细胞亚群［T/B淋巴细胞、自然杀伤（NK）细胞］的绝对计数均有不同程度降低，其中T细胞降低者最多（占95%）；在T细胞中，T辅助/诱导细胞（T4）降低者（100%）多于T抑制/NK细胞（T8）降低者（87%）。从各类淋巴细胞分布看，T淋巴细胞百分率下降者最多（58%）；B细胞和NK细胞百分率以相对正常或升高为主，相对下降者均很少，分别占2.6%和5.3%；在T细胞中，T4细胞的百分率降低者（82%）高于T8细胞降低者（34%），两者比值降低者占44%。 结论 SARS患者的淋巴细胞总数及其各亚群均受到破坏，以T淋巴细胞受损为主，且T4细胞较T8细胞受损严重；淋巴细胞亚群的绝对计数变化较相对计数更明显。

目的 报道严重急性呼吸综合征（SARS）的胸部X线表现。 方法 分析105例SARS患者的胸部X线表现及特征。所有患者均为在2003年1月30日至3月31日期间进行诊治、并符合中华人民共和国卫生部制定的传染性非典型肺炎临床诊断试行标准，且在住院治疗期间有完整胸部X线片资料的患者。病变根据早期表现和进展情况分为4型。（1）局限型：由肺内单一局部病灶到病变发展或广泛分布。（2）多发型：早期即见肺内多发片状或（和）结节状病灶。（3）间质-实质型：以肺部间质性炎症为早期主要表现，其后出现明显的肺实质渗出性病变。（4）间质型：以肺间质异常为主要表现。 结果 SARS患者的胸部X线表现形式多样，75例表现为肺内渗出性实变病灶，其中局限型57例，多发型18例。25例呈间质性炎症征象，随后出现明显肺内实变。5例主要表现为肺间质性炎症。首次见肺内病变至病变完全吸收的时间为7~46d，平均为19d。 结论 SARS的X线表现以肺实质渗出性病变和间质性炎症为主，病变早期发展迅速，肺内实变于首诊后7~10d达高峰，其后大部分患者可完全吸收。绝大多数患者预后良好，目前尚未见后遗症。

目的 探讨严重急性呼吸综合征（SARS）的早期X线和CT表现。 方法 对28例SARS患者的早期X线和CT表现进行分析。患者在发病1~3d内行X线及CT检查。CT检查包括常规螺旋扫描和高分辨率CT（HRCT）。 结果 28例中胸部CT检查均有异常所见。X线胸片发现病变者占60.7%（17/28）。影像表现可分为：（1）单发小片状病灶：占82.1%（23/28）。在CT影像上病变分为3种形态：①类圆形磨玻璃样密度病灶20例；②肺小叶形态的磨玻璃样密度病灶2例；③小片状实变影像1例。（2）多发小片状磨玻璃样病灶2例。（3）大片状影像3例。28例患者共发现31个病灶，其分布上叶7个，占22.6%；中叶3个，占9.7%；下叶21个，占67.7%。病灶最大径多为2.0~3.5cm。 结论 SARS早期X线和CT主要表现为肺内单发小片状影像。CT显示病变的形态以类圆形磨玻璃样密度病灶最为多见。

目的 研究严重急性呼吸综合征（SARS）患者T淋巴细胞改变特点，探讨其发病机制，提高SARS的早期诊断水平。 方法 收集本院急诊留观的30例确诊为SARS患者和56名健康献血员的抗凝血，用特异性荧光抗体标记，通过流式细胞仪检测其CD+4和CD+8的T淋巴细胞亚群变化，对其中2例恢复后的SARS患者复查CD+4和CD+8的T淋巴细胞亚群，并与人类免疫缺陷病毒（HIV）、巨细胞病毒（CMV）和EB病毒（EBV）感染患者的T淋巴细胞亚群改变进行比较。 结果 与正常人相比，SARS患者的CD+4T淋巴细胞（简称“T4细胞”）和CD+8T淋巴细胞（简称“T8细胞”）数量均显著减少［（284±187）个/mm3和（288±167）个/mm3］，所有SARS患者的T4细胞计数均低于正常（最低仅为49个/mm3），恢复期2例SARS患者的T4和T8细胞恢复正常；与HIV、CMV、EBV感染者相比，SARS患者的T4细胞和T8细胞数量也显著减少，而T8细胞数量的减少则更为严重；与正常人相比，HIV感染者T4细胞数量也显著减少，但HIV、CMV、EBV感染者的T8细胞数量均显著增加。 结论 SARS患者的T淋巴细胞数量显著降低，但可逆转；T4和T8细胞的检测有助于早期诊断SARS患者。

目的 探索2002年末暴发于广东等地的非典型肺炎的病原。 方法 对来自广东、山西、四川省和北京市的7例非典型肺炎死亡病人的尸体解剖标本进行超薄切片电镜观察，将病人肺组织提取物接种于293细胞（人胚肾转化细胞系），分离病原，对病人组织中和分离的病原进行免疫学鉴定。 结果 超薄切片电镜观察，在死亡患者的肺（7例）、脾（2例）、肝（2例）、肾（3例）和淋巴结（1例）中均观察到衣原体样包涵体和网质小体、中间体、原生小体颗粒的存在，并在3例病人肺组织中同时见到了冠状病毒样颗粒和未知的基质样结构。用RT-PCR方法从2例病人肺组织中扩增出冠状病毒RNA聚合酶基因片段。将病人肺组织提取物接种于293细胞进行培养，取第2代细胞作电镜观察，也发现衣原体样颗粒和包涵体的存在。在病人组织和培养细胞中见到的衣原体样颗粒均不能与衣原体属特异性抗体和抗肺炎衣原体、鹦鹉热衣原体抗体反应，提示可能为新的衣原体样因子。 结论 在死亡病人组织和培养细胞中发现的衣原体样和冠状病毒样颗粒，可能是广东等地暴发的非典型肺炎的主要病原。

目的 建立荧光聚合酶链反应（F-PCR）检测严重急性呼吸综合征（SARS）冠状病毒的方法，并探讨其临床应用价值。 方法 根据公布的SARS冠状病毒基因序列，自行设计合成引物和探针，应用研制的SARS F-PCR诊断试剂盒，检测115份临床漱口液样本。 结果 PCR扩增产物经测序证明与SARS冠状病毒基因序列完全一致。67例确诊SARS患者漱口液中49份为阳性；18例密切接触者漱口液中8份为阳性；30名健康者漱口液均阴性。 结论 建立的F-PCR检测SARS冠状病毒方法可成为SARS筛查和早期诊断的一种快速、准确、有效的检测方法。