2005年 · 第21卷第04期

apheresis,即单采血液成分技术,自上世纪50年代以来,随着高分子材料科学和生物医学工程技术的迅猛发展,已广泛应用于临床各学科,成为许多自身免疫性疾病、血液系统疾病、心脑血管疾病、重症肝病、重症感染、药物中毒等有效治疗手段。

目的 研究肾移植受者术前巨细胞病毒(CMV)感染对术后急性排斥的影响及预防性抗病毒治疗的意义.方法回顾性分析416例肾移植受者的术前巨细胞病毒感染,预防性抗病毒治疗和急性排斥的发生情况,并用Logistic回归分析各因素对急性排斥的影响.术前感染受者根据有无预防性抗病毒治疗分为治疗组和非治疗组,比较两组间急性排斥发生率.结果术前巨细胞病毒感染组的急性排斥率显著高于非感染组(29.9%比19.5%,P=0.014),术前感染受者发生急性排斥的风险增高将近1倍.预防性抗病毒治疗能降低术后CMV疾病的发生率但对急性排斥无影响.结论术前巨细胞病毒感染是术后急性排斥独立的危险因子.常规的预防性抗病毒治疗并不能减少由感染介导的免疫损伤而导致的急性排斥的发生。

目的 通过分析COL4A5基因附近的12个微卫星遗传标记形成的单倍体图,排除性定位一个Alport综合征家系的致病相关基因.方法应用聚合酶链反应(PCR)扩增COL4A5基因附近的微卫星遗传标记DXS993、DXS991、DXS986、DXS990、DXS1106、DXS8048、DXS1220、DXS8055、DXS1001、DXS1047、DXS122、DXS8043,绘制单倍体图分析.结果该家族中来自不同家庭的患者COL4A5基因的微卫星标记单倍体型不同,并在遗传过程中在不同个体的COL4A5基因附近发生了交换.结论排除该Alport综合征家系致病基因是通过X染色体连锁的方式遗传,而可能是常染色体上基因突变致病。

目的 对比分析糖尿病肾病和糖尿病合并的非糖尿病性肾脏疾病的不同临床特征,探索两组疾病的临床鉴别诊断依据,建立糖尿病肾病诊断概率回归方程.方法肾活检前临床诊断为糖尿病肾病患者共110例,经肾活检后,按病理诊断分为两组:DN组(糖尿病肾病)60例,NDRD组(非糖尿病性肾脏疾病)50例.对两组资料进行统计分析.结果单因素及多因素回归分析显示,糖尿病患病时间、收缩压、糖化血红蛋白、有无血尿和视网膜病变与糖尿病肾病诊断相关.由所得参数建立糖尿病肾病诊断概率回归方程.经检验,方程判断糖尿病肾病灵敏度为90%,特异度为92%,阳性预测值为93%,阴性预测值为88%,准确率为91%.结论2型糖尿病伴肾脏损害并不一定是糖尿病肾病,相当部分是非糖尿病性肾脏疾病,回归方程的建立可为临床鉴别诊断提供帮助。

目的 探讨甲状旁腺激素(PTH)在体外直接对破骨细胞(OCs)分化及骨吸收能力的影响,以及其与成骨细胞(OBs)中核因子κB受体激活剂受体配体(ligand of receptor activator of nuclear factor kappa B,RANKL)基因和OPG(osteoprotegerin)基因表达的关系.方法体外直接用PTH诱导C3h小鼠全骨髓分化出OCs,用牙片小坑法(pits assay)观察OCs对骨的重吸收能力.并采用多重RT-PCR方法检测在不同PTH作用浓度和不同作用时间的条件下,OBs中RANKL基因和OPG基因的表达情况.结果(1)PTH在体外可诱导C3h小鼠全骨髓分化出OCs,且在一定浓度范围内,随着PTH增加,OCs的形成数目和骨组织的破坏程度随之增加;(2)在一定PTH浓度和时间范围内,OBs中的RANKL-mRNA及OPG-mRNA表达呈剂量依赖性和时间依赖性.结论PTH在体外可通过诱导RANKL基因和OPG基因表达而直接影响OCs的分化和骨重吸收功能。

目的 筛选与新基因AngRem104相互作用的蛋白,并验证AngRem104和Bardet-Biedl综合征2(BBS2)蛋白在哺乳动物细胞中的相互作用,为进一步研究AngRem104的生理功能奠定基础.方法构建AngRem104的酵母真核表达载体AngRem104-pGBKT7/c-myc,用以转化酵母菌AH109,并与转化了成人肾脏cDNA文库的酵母菌Y187接合,筛选与AngRem104相互作用的蛋白.从中挑选Bardet-Biedl综合征2蛋白进行免疫共沉淀,构建AngRem104-pcDNA3.1/V5-His和BBS2-pCMV/c-myc融合表达载体,共转染HEK293T细胞.分别用小鼠抗人c-myc单克隆抗体和小鼠抗人V5-HRP抗体进行免疫沉淀和免疫印迹,以验证AngRem104和BBS2蛋白间的相互作用.结果以AngRem104为诱饵蛋白在人肾脏cDNA文库中共筛选到包括BBS2在内的7个与之存在相互作用的蛋白.免疫共沉淀结果显示,AngRem104-V5融合蛋白能够在c-myc抗体的免疫沉淀物中检测出来;在V5抗体的免疫沉淀物中也能检测到BBS2-c-myc融合蛋白.结论AngRem104和BBS2蛋白在哺乳动物细胞中存在某种相互作用,为新基因AngRem104功能探讨和Bardet-Biedl综合征发病机制的研究提供了有价值的线索。

目的 探讨大鼠低亲和力钠依赖二羧酸转运蛋白(SDCT1)对枸橼酸及草酸的转运特点.方法克隆出大鼠SDCT1全长cDNA基因.应用爪蟾卵母细胞异源性表达SDCT1,并使用双电极电压钳法记录通道电流.通过改变灌流液中枸橼酸、草酸的浓度,以及两种底物转运时钠离子的浓度及pH值,对其特性进行了研究.结果SDCT1对枸橼酸及草酸的转运均为底物浓度及钠离子依赖.pH值变化显著影响2者的转运.但低pH对草酸的转运影响要远大于枸橼酸.结论在临床实践中,虽然升高尿液pH值可以抑制枸橼酸的重吸收,发挥其抑制钙盐沉积的功能.但过度地碱化尿液也会使草酸的重吸收受到抑制,使草酸大量存留在尿中而导致结石.保持适当的尿酸碱度是必要的。

目的 研究血管紧张素Ⅰ型受体(ATl)反义(AS)寡核苷酸(ODN)对大鼠肾脏局部肾素-血管紧张素系统(RAS)的阻断作用.方法采用单侧肾动脉注射+原位电穿孔的方法,将AT1 AS-ODN导入到Wistar大鼠的一侧肾脏,观察以FITC荧光标记的ODN在肾脏的转移位置,以AT1放射自显影定量分析的方法观察转移基因的时间-效应曲线.在基因转移3 d后以RT-PCR、Western印迹及免疫组织化学方法检测肾脏AT1的mRNA和蛋白表达与分布,并与正义(Sen)ODN转移、假注射+肾脏原位电穿孔(Sham)作为对照.结果FITC标记的ODN在基因转移10 min后主要定位于转移侧肾脏的肾小球,而对侧肾脏FITC荧光阴性.AT1放射自显影定量分析显示在基因转移后的3 d内,结合有血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)的AT1较未转移的对侧肾脏减少约70%.AT1 AS-ODN基因转移后3 d,转移侧肾脏AT1 mRNA水平较对侧肾脏下降约43%,蛋白水平下降约67%,而与AT1 Sen-ODN和Sham组转移侧肾脏比较,AT1的mRNA水平下降分别约47%和51%,蛋白水平下降分别约63%和71%.免疫组化检查发现AT1的阻断以系膜区的表达减少为主.结论本研究所用的单侧肾动脉注射+原位电穿孔的基因转移方法成功地抑制了单侧肾脏的肾小球AT1受体的表达,为研究全身性疾病肾损害中肾脏局部RAS的短期作用机制提供了一个比较理想的整体动物模型。

目的 观察血管肽酶抑制剂omapatrilat对5/6肾切除大鼠肾衰模型肾小管间质病变的影响,探索防治肾小管间质纤维化的新途径.方法建立5/6肾切除肾衰大鼠模型,随机分成手术对照组、Omap 10 mg组(omapatrilat 10 mg·kg-1·d-1)和Omap 40 mg组(omapatrilat 40 mg·kg-1·d-1),另设假手术组和正常对照组.12周后观察比较各组间大鼠尾部动脉收缩压、肾功能、肾小管间质纤维化水平(HE、Masson、PAS和PASM染色,半定量分析).结果(1)omapatrilat能明显降低5/6肾切除肾衰竭大鼠血压水平[(153.67±9.69)mmHg比(192.00±10.45)mmHg,P＜0.01],且Omap 40 mg组降压效果明显优于Omap 10 mg组[(142.50±11.14)mmHg比(153.67±9.69)mmHg,P＜0.05];(2)omapatrilat能改善5/6肾切除肾衰竭大鼠肾功能[Scr(61.00±15.50)μmol/L比(97.00±34.10)μmol/L,P＜0.01;BUN(19.38±3.65)mmol/L比(30.23±9.31)mmol/L,P＜0.01];(3)omapatrilat可减轻肾小管间质纤维化程度(2.0±0.63比2.83±0.55,P＜0.05),但40 mg和10 mg两剂量组差异无统计学意义.结论omapatrilat能明显降低5/6肾切除大鼠血压水平,显著改善其肾功能及延缓肾小管间质纤维化进展。

目的 动态观察血管形成素样蛋白3(angiopoietin-like protein 3,ANGPTL3)在阿霉素大鼠肾病模型肾组织中表达水平的时相变化及细胞定位情况,探讨其与微小病变型肾病综合征蛋白尿及高脂血症之间的关系.方法给予大鼠一次性尾静脉注射阿霉素建立微小病变型肾病综合征大鼠模型.采用免疫组织化学染色和斑点-ELISA,检测阿霉素注射后第7天、第14天、第21天和第28天大鼠肾组织ANGPTL3的表达及分布.分析其与24 h尿蛋白量及血清胆固醇(Cho)和甘油三酯(TG)的关系.结果(1)阿霉素注射后第14天开始出现大量蛋白尿(P＜0.01),血清白蛋白明显减少(P＜0.01),Cho(P＜0.01)和TG(P＜0.05)明显增高,以上各项指标均在第28天达高峰.(2)免疫组化定量分析显示阿霉素注射后第14天时,肾小球中ANGPTL3免疫组化指数增高至同一时间点对照组的1.42倍(P＜0.05);第21天时,为同一时间点对照组的2.48倍(P＜0.01),在肾小管中的表达也明显增高,免疫组化指数为同一时间点对照组的2.04倍(P＜0.01);到第28天,其在肾小球和肾小管中的表达均达最高水平,肾小球的免疫组化指数为同一时间点对照组的3.28倍(P＜0.01),肾小管的免疫组化指数为同一时间点对照组的2.5倍(P＜0.01).(3)ANGPTL3在肾小球中的表达部位主要位于足细胞胞浆,此外,也可见于肾小管上皮细胞胞浆中.(4)阿霉素注射后第7天,实验组大鼠血清中ANGPTL3含量仅是同一时间对照组的51%(P＜0.01);第14天时升至对照组的71%(P＞0.05);第21天时升至对照组的115%(P＞0.05);至第28天时,升至同一时间点对照组的141%(P＜0.05).(5)ANGPTL3在肾小球中的表达量与24 h尿蛋白量呈显著正相关(r=0.81,P＜0.01);肾小管中ANGPTL3的表达量与Cho、TG也存在正相关(r=0.70、0.65,P均＜0.01).结论ANGPTL3在大鼠的肾组织中表达,主要位于肾小球足细胞胞浆,也可见于肾小管上皮细胞胞浆中.随着尿蛋白量、Cho及TG水平的增加,肾组织中ANGPTL3蛋白表达水平亦增高.尿蛋白量和血脂水平与ANGPTL3的表达密切相关。

目的 探讨大鼠系膜细胞(MsC)中碱性调宁蛋白(calponin)h1与TGF-β1的表达及其相互关系.方法制备大鼠抗thy-1系膜增生性肾炎模型(ATG).应用免疫组织化学ABC法、Western印迹、RT-PCR等方法分别从蛋白和核酸水平检测calponin h1和TGF-β1在肾炎模型第1、3、5、7、14、21、28天组织中的表达;采用细胞免疫化学和细胞免疫荧光法检测培养大鼠MsC中calponin h1的表达;应用Western印迹和RT-PCR的方法观察精氨酸和乙醇分别孵育后大鼠MsC中calponin h1和TGF-β1的表达变化.结果与少量表达calponin h1和不表达TGF-β1的正常组比,肾炎3 d组至14 d组calponin h1表达明显增强,7 d组至28 d组TGF-β1表达显著增强(P＜0.05).calponin h1表达定位于大鼠MsC胞浆内.精氨酸作用后大鼠MsC TGF-β1表达增强,calponin h1表达减弱;乙醇作用后大鼠MsC表达calponin h1升高,表达TGF-β1降低.结论ATG大鼠MsC中calponin h1表达在肾小球病变早期增强,后期减弱;而TGF-β1表达则在肾小球病变中晚期显著增强.calponin h1可能具有负反馈调节TGF-β1表达的作用。

目的 研究血清和糖皮质激素诱导的蛋白激酶1(SGK1)在高糖诱导人近端肾小管上皮细胞(HKC)产生纤连蛋白(FN)中的作用,探讨SGK1在糖尿病肾病(DN)肾小管间质纤维化中的作用机制.方法将带有SGK1显性激活型突变体质粒(pIRES2-EGFP-s422DSGK1 mutant,SD)和带有SGK1显性失活型突变体质粒(pIRES2-EGFP-K127NSGK1 mutant,KN)分别瞬时转染HKC;同时,设空质粒(pIRES2-EGFP,FP)转染组和未转染组(NT)为对照.分别用正常糖(NG,5.5 mmol/L D-葡萄糖)和高糖(HG,25 mmol/L D-葡萄糖)刺激8 h后,采用RT-PCR和Western印迹来观察SGK1和FN的mRNA及蛋白的表达.结果正常葡萄糖环境下转染SD和KN后,HKC合成的FN mRNA和蛋白的表达没有显著性改变.高糖环境下,转染SD的HKC与其它组比较,其SGK1mRNA表达显著性增高(P＜0.01),SGK1蛋白过度活化(P＜0.01),其FN mRNA和蛋白的表达显著增加(P＜0.01).转染KN的HKC与其它高糖组HKC比较,其活化的SGK1蛋白显著减少(P＜0.01),其合成FN mRNA和蛋白亦显著减少(P＜0.01).结论高糖诱导HKC的FN mRNA和蛋白的表达增加是依赖于SGK1的表达与活化,提示在DN中,高糖能通过SGK1介导的信号通路来诱导人近端肾小管上皮细胞过度合成FN,促进肾小管间质纤维化。

有关慢性肾功能不全(CRI)植物神经损害的神经电生理的研究报道较少.我们对52例CRI患者进行交感神经皮肤反应(SSR)的研究,现报告如下。

据报道,肾衰竭患者只有51.41%生活质量较好,5.7%能工作,因此,其疗效欠佳.近年肾衰竭营养治疗,受到各国肾脏病学者和营养学家的高度重视.本研究目的是改善肾衰竭患者营养,提高生活质量。

我们试用霉酚酸酯(MMF)加常规疗法治疗9例紫癜性肾炎患者,取得较好的临床效果,现报告如下。

乌司他丁(ulinastatin UTI)是胰蛋白酶抑制剂,能有效抑制多种水解酶的活性、抑制细胞因子和炎症介质的释放.除治疗急性胰腺炎外,UTI还具有保护组织的作用.我们观察探讨国产UTI(天普洛安)对术后肾功能的影响。

随着生命科学研究的深入,单基因或蛋白质的研究方法已难以诠释生物体病理生理过程的全貌,人们开始涉足对多基因、多种蛋白质的研究。

血管通路是长期血液透析患者的生命线,由于内瘘血管的长期穿刺,局部损伤等因素,瘘管可能出现狭窄,导致患者肢体远端肿胀,影响患者的日常生活及透析治疗.采用电子计算机断层扫描血管造影(CTA),了解血管通路狭窄的部位、程度、走向等,可为进一步手术处理或数字减法血管造影(DSA)介入治疗提供帮助。

肝细胞生长因子(HGF)是一种具有多种生物学效应的蛋白.研究表明,重组HGF或HGF基因治疗可以明显延缓肾小管间质纤维化的进展.我们利用单侧输尿管梗阻(UUO)模型观察ACEI福辛普利对大鼠输尿管梗阻后肾脏HGF、转化生长因子β1(TGF-β1)及增殖细胞核抗原(PCNA)表达的影响,从而为ACEI在减轻肾间质炎症和纤维化中的应用提供新的理论依据。

研究发现,脂质异常多伴有肾功能的降低并参与肾脏疾病的发生发展.血管壁植物血凝素样低密度脂蛋白(ox-LDL)受体1(LOX-1)是细胞毒性ox-LDL在内皮细胞中的新型受体.本研究通过建立兔高胆固醇血症(HC)模型,观察氟伐他汀对兔肾脏损伤的干预作用,并通过检测肾动脉血管壁LOX-1基因和蛋白的表达水平,以探讨其发挥作用的可能机制。

JAK(Janus kinase)/STAT(signal transducer and activatior of transcription)信号途径能够介导多种细胞因子和生长因子的细胞内信号转导过程.有关此信号途径在糖尿病肾脏表达的研究少见报道。