2002年 · 第22卷第06期

肝细胞性肝癌以其高发病率和高恶性行为而著称,占我国癌症死亡的第二位.尽管流行病学资料已强烈提示乙肝病毒的感染及其它致癌因子的作用与肝细胞癌的发生具有相关性,但这种相关关系是如何建立起来的,近几十年来分子生物学的研究至今没有提出令人信服的解释,但却使我们对肝细胞癌发生机制的认识过于复杂化了.本文从肝的组织发生和组织再生入手,结合乙肝病毒感染后肝组织的病理发展过程及当今干细胞研究的最新结论,从发育生物学观点探讨了肝细胞癌发生的机制.这一模式使得肝细胞癌若干令人费解的生物学现象,譬如低分化状态、AFP的表达、端粒酶激活、病毒的低复制或不复制及病毒蛋白的低表达或不表达状态、染色体结构的紊乱及(或)突变、肝癌的多中心性起源等,变得易于理解.尤其重要的是,这一模式使得我们有理由研究如何通过改变肝癌组织的微环境来诱导癌细胞向正常细胞分化,而达到治愈肝细胞癌的目的.

肝细胞性肝癌以其高发病率和高恶性行为而著称,占我国癌症死亡的第二位.尽管流行病学资料已强烈提示乙肝病毒的感染及其它致癌因子的作用与肝细胞癌的发生具有相关性,但这种相关关系是如何建立起来的,近几十年来分子生物学的研究至今没有提出令人信服的解释,但却使我们对肝细胞癌发生机制的认识过于复杂化了.本文从肝的组织发生和组织再生入手,结合乙肝病毒感染后肝组织的病理发展过程及当今干细胞研究的最新结论,从发育生物学观点探讨了肝细胞癌发生的机制.这一模式使得肝细胞癌若干令人费解的生物学现象,譬如低分化状态、AFP的表达、端粒酶激活、病毒的低复制或不复制及病毒蛋白的低表达或不表达状态、染色体结构的紊乱及(或)突变、肝癌的多中心性起源等,变得易于理解.尤其重要的是,这一模式使得我们有理由研究如何通过改变肝癌组织的微环境来诱导癌细胞向正常细胞分化,而达到治愈肝细胞癌的目的.

目的研究糖皮质激素对辐射诱导P388白血病细胞凋亡与NF-κB活化的影响.方法采用TdT介导的dUTP缺口末端标记技术(TUNEL)检测细胞凋亡;采用电泳迁移率变动分析(EMSA)检测P388细胞NF-κB活化水平.结果 2、4、6和8Gy辐射能诱导P388细胞凋亡,同时使NF -κB活化.地塞米松(DXM)增强由2、4、6和8 Gy辐射诱导的P388细胞凋亡,抑制由2,4,6和8 Gy辐射诱导的P388细胞NF κB活化,凋亡增加率分别为60%、100%、129%和67%,NF-κB活化抑制率分别为25%、45%、52%和40%.结论辐射诱导P388白血病细胞凋亡的同时激活NF-κB;糖皮质激素可通过抑制NF-κB活化,增强其诱导白血病细胞凋亡的作用.

目的观察低剂量辐射对脐血淋巴细胞增殖、CD25分子表达、IL-2水平和NK细胞活性的影响.方法①采用3H-TdR掺入法和3H-TdR释放法检测 62 mGy、124 mGy、186 mGy γ射线照射新鲜分离的脐血淋巴细胞增殖和NK细胞活性.②采用单克隆抗体直接免疫荧光标记流式细胞术和酶联免疫吸附实验检测62 mGy γ射线照射新鲜分离的脐血淋巴细胞在不同时间(12 h,24 h,48 h)CD25分子表达和培养上清液的IL-2水平.结果在一定剂量范围内的低剂量辐射显著促进脐血淋巴细胞增殖和增强NK细胞活性.62 mGy γ射线照射后脐血淋巴细胞CD25表达和IL-2水平显著上调,CD25表达和IL-2的水平随时间推移逐步增高.结论在一定剂量范围内的低剂量辐射能促进淋巴细胞的增殖、活化和成熟,增强NK细胞活性.低剂量辐射对脐血免疫细胞存在兴奋效应.可能加速脐血移植时造血功能和免疫功能的重建,这可能增加移植物抗白血病效应,降低其复发,显示出临床应用前景.

目的研究人支气管上皮细胞恶性转化过程中,TGF-β1表达水平的变化及其对细胞生长、增殖的影响,为进一步研究辐射诱发肿瘤发生的机理奠定基础.方法在24孔板中按5×104细胞/孔分别接种对数生长期的BEP2D及BERP35T-2细胞,用一定浓度的TGF-β1处理,计数,绘制细胞生长曲线,同时于光镜下观察细胞形态及生长状况.用western blot方法检测胞浆内及分泌到培养液中的TGF-β1的丰度.结果两种细胞胞浆内的TGF-β1表达水平无明显差异,但BERP35T-2细胞分泌到培养液中的 TGF-β1丰度约为BEP2D细胞的5倍.TGF-β1对两种细胞的生长均有抑制作用.在相同的浓度下,TGF-β1对BERP35T-2细胞的生长抑制作用较BEP2D细胞弱.结论在辐射诱发人支气管上皮细胞恶性转化过程中TGF-β1对其生长抑制作用减弱.

目的探讨局部照射对创伤愈合过程中伤口成纤维细胞PDGF-A及PDGFR-α表达的影响及意义.方法将132只Wistar大鼠分为单纯创伤组(对照组)和照射复合创伤组(照射组),用免疫组织化学、原位RT PCR和图像分析方法检测两组伤口伤后1～60 d各时间点PDGF-A、PDGFR-α蛋白及PDGF-A mRNA的表达规律.结果局部照射使伤口愈合各阶段滞后、延长.对照组伤口成纤维细胞PDGF-A和PDGFR-α表达有明显的时相性,PDGF-A在伤后2～21 d可见表达,5 d为表达高峰;照射组在伤后各时间点其表达均减弱,且表达时相延长,伤后28 d仍有表达;PDGFR-α在对照组于伤后2～15 d有表达,5 d时达高峰,照射组PDGFR-α表达减弱,但其表达时相与对照组一致.结论 照射抑制伤口成纤维细胞内源性PDGF-A及PDGFR-α的表达,表明照射使成纤维细胞自分泌PDGF-A功能减弱并对外源性PDGF-A的反应性减弱,进而导致伤口愈合延迟.

目的研究α粒子诱发人支气管上皮细胞(BEP2D)癌变细胞系BERP35T-1和BERP35T- 4的DNA断裂损伤修复能力,分析其DNA断裂修复基因XRCCs系列的mRNA表达.方法脉冲电场凝胶电泳法检测DNA双链断裂,RT-PCR分析DNA修复基因的mRNA表达.结果恶性转化细胞系BERP35T-1和BERP35T-4受0～150 Gy γ射线照射后修复4 h的DNA断裂残留损伤显著高于亲本BEP2D细胞,mRNA表达分析显示修复基因XRCC2、XRCC3和Ku80(XRCC5)表达下调 2 5～6 5倍,而BERP35T-4细胞中DNA -PKcs(XRCC7)表达上调2.4倍.结论 α粒子诱发恶性转化细胞系的DNA链断裂修复机理缺陷,其中部分原因是DNA修复基因的表达抑制.DNA修复缺陷将导致细胞基因组不稳定性,α粒子诱发细胞恶性转化机理可能与此相关.

目的观察γ射线照射人肿瘤细胞和正常细胞后端粒酶的变化及其与细胞死亡的关系.方法检测照射后不同时间细胞端粒酶活性,细胞内端粒酶原位表达以及死亡细胞总数和形态观察.结果在1～5 Gy吸收剂量范围内A549和L02细胞辐射诱导死亡以凋亡为主要途径;在凋亡发生的过程中,端粒酶原位检测显示60%～90%的细胞中存在强烈的端粒酶信号,TRAP检测示端粒酶活性表达增强,提示放射损伤可诱导端粒酶活性增高,高端粒酶活性状态可持续至细胞发生凋亡.结论γ射线诱导人肿瘤和正常细胞凋亡可能不是通过直接抑制端粒酶活性的机理;辐射诱导端粒酶活性增高可能是细胞修复辐射损伤的机理之一.

目的筛选与鉴定电离辐射损伤相关的内皮细胞基因.方法利用mRNA差异显示技术,以正常人脐静脉内皮细胞(HUVEC)和电离辐射后的HUVEC为实验材料,筛选与60Co γ电离辐射损伤相关的基因片段.结果经测序和鉴定,发现基因KIAA0456的两个外显子STSs和GSSs,ARF3基因在辐射后的内皮细胞中表达增加.结论内皮细胞由上述两基因介导的细胞分化、信号传导、细胞粘附及增殖功能在辐射后增强.

目的探讨89Sr诱发K562癌细胞凋亡放射毒理效应的分子机理.方法采用分子病理和定量病理技术研究89Sr内照射诱导的K562癌细胞凋亡、剂量效应关系和重要相关基因bcl-2和bax在其中的表达.结果 K562细胞经89Sr内照射6和24 h,提取DNA,琼脂糖凝胶电泳图谱上出现典型的"阶梯状"区带,伴有"拖尾",而对照组未见"阶梯状"区带;荧光双标记流式细胞仪法定量检测,89Sr内照射6、9、12、24和48 h后,K562细胞凋亡率和坏死率均较对照组有明显升高(P<0.01),随着89Sr内照射时间的延长、累积剂量的提高,均无显著变化(P>0.05);免疫组织化学染色显示,对照组K562细胞中bcl-2和bax蛋白均有表达,bcl-2蛋白表达阳性细胞率82.8%,bax为44.4%,bcl-2/bax比值1.86;89Sr内照射24 h后的K562细胞中,bcl-2蛋白表达阳性细胞率31.4%,bax为38.2%,bcl-2/bax比值0.82,与对照组相比,差异显著(P<0.05);RT PCR显示bcl-2 mRNA在对照组K562细胞中高表达;89Sr内照射12 h后已有明显的下调,24 h后则非常显著.结论 89Sr内照射K562细胞后,细胞凋亡与细胞坏死并存,且89Sr诱导K562细胞的凋亡可能是通过bcl-2 mRNA及其蛋白表达降低,bcl-2/bax比值下降而调控的.

肝细胞性肝癌以其高发病率和高恶性行为而著称,占我国癌症死亡的第二位.尽管流行病学资料已强烈提示乙肝病毒的感染及其它致癌因子的作用与肝细胞癌的发生具有相关性,但这种相关关系是如何建立起来的,近几十年来分子生物学的研究至今没有提出令人信服的解释,但却使我们对肝细胞癌发生机制的认识过于复杂化了.本文从肝的组织发生和组织再生入手,结合乙肝病毒感染后肝组织的病理发展过程及当今干细胞研究的最新结论,从发育生物学观点探讨了肝细胞癌发生的机制.这一模式使得肝细胞癌若干令人费解的生物学现象,譬如低分化状态、AFP的表达、端粒酶激活、病毒的低复制或不复制及病毒蛋白的低表达或不表达状态、染色体结构的紊乱及(或)突变、肝癌的多中心性起源等,变得易于理解.尤其重要的是,这一模式使得我们有理由研究如何通过改变肝癌组织的微环境来诱导癌细胞向正常细胞分化,而达到治愈肝细胞癌的目的.

目的比较数值积分和蒙特卡罗方法计算的放射性支架的剂量率分布.方法以3种有代表性的剂量点核函数为计算模型,计算支架的剂量率分布.结果分别计算了中心面的径向、支架表面及离支架表面0.5 mm处的轴向剂量分布,径向最大差异为1.5%,轴向的差异也在1. 5%之内.结论 3种函数用数值积分和蒙特卡罗方法计算的剂量分布是一致的,蒙特卡罗方法可用来计算放射性支架的剂量分布.

目的计算经肝动脉灌注90Y微球治疗肝癌后肿瘤及正常组织内的吸收剂量分布情况.方法用Campbell AM等人的肝癌病人经 90Y微球治疗后的肿瘤切片实验结果进行微球的分布模拟,然后计算肿瘤及正常组织的吸收剂量并画出吸收剂量自肿瘤中心沿径向的分布图,并与其他微球分布模型的计算结果进行比较.结果用本文中的微球分布计算所得的总微球数接近于实际注入肝脏部位的微球数,以此分布为基础的剂量计算结果表明:治疗后绝大部分正常组织的吸收剂量均小于其耐受剂量但同时在肿瘤中心部位也存在欠剂量区,此结果要较相同治疗活度下其他两种微球分布模型计算的结果更接近于实际情况;相同治疗活度及微球分布时 90Y微球治疗后的剂量均匀性较32P的略优.结论90Y微球治疗肝癌后的剂量计算最好采用微球的不均匀分布模型才能正确反映实际剂量分布并解释临床实际疗效.

目的探讨不同室壁材料的DIS辐射探测器对γ辐射能量响应的规律与特点.方法设计不同室壁材料的电离室,利用蒙特卡罗方法粒子输运技术,模拟计算DIS探测器电离室对不同能量γ辐射的能量响应.结果用Al、Mg作为电离室室壁材料时,当光子能量在30～100 keV范围内时,电离室能量响应增加很大;而对C、A-150塑料来讲,在计算中整个能量范围内,能量响应变化不大,线性响应较好.结论组织等效材料(A-150)作为电离室室壁材料时,可以使电离室能量响应得到根本改善,从而满足个人吸收剂量线性测量的需要.

目的建立用牙釉电子自旋共振对慢性辐射损伤人员的受照剂量进行估算的方法.方法用电子自旋共振仪测定慢性辐射损伤人员牙釉电子自旋共振信号强度,用剂量-效应曲线法和附加剂量法来重建辐射损伤人员的受照剂量,探讨牙釉电子自旋共振法估算受照剂量的可行性;并比较了不同能量的射线(1.25 MeV的γ射线和6 MeV的X射线)对牙釉电子自旋共振信号强度的影响.结果用两种方法估算的辐射损伤人员受照剂量基本一致;对能量1.25 MeV的γ射线和 6 MeV的X射线进行比较,无论从剂量效应曲线的直线系数,还是用混合照射后的剂量估算,两者差别不大.结论慢性辐射损伤人员的受照剂量可以用牙釉电子自旋共振方法进行估算,射线能量在1.25 MeV-6 MeV范围内对牙釉电子自旋共振信号强度影响不大.