2002年 · 第18卷第02期

目的探讨Th1/Th2细胞失衡在原发性肾病综合征(PNS)患儿发病中的作用.方法运用三色荧光标记法流式细胞术检测21例初发和16例缓解期NS患儿外周血Th1和Th2细胞百分率(%),并以10例正常儿童作对照.结果正常儿童外周血Th1、Th2和Th0细胞百分率分别为(13.42±4.36)%,(2.53±1.97)%和(1.25±0.92)%.初发的PNS患儿均明显减低,分别为(2.34±2.09)%,(1.02±0.96)%和(0.40±0.38)%(P＜0.05).缓解期PNS患儿,分别为(11.96±4.75)%,(2.87±2.46)%和(1.31±0.87)%,与正常儿童比,差异均无显著性意义.由于初发的PNS患儿Th1细胞减低相对于Th2细胞而言更显著,因而导致Th1/Th2比值也较缓解期PNS患儿和正常儿童明显下降(2.43±2.65比4.17±2.32和5.41±2.77,P均＜0.05).结论儿童PNS是一种以Th2细胞占优势的免疫介导的肾小球疾病,源于Th1细胞减低所致的Th1/Th2细胞失衡在原发性肾病综合征发病过程中可能起着重要作用.

目的观察转化生长因子beta 1(TGF-β1)反义RNA对系膜细胞基质合成的影响.方法构建含TGF-β1反义RNA的重组腺病毒,将重组腺病毒转染系膜细胞,用Northern blot检测转染系膜细胞TGF-β1及ColⅣmRNA的含量,用免疫组化半定量分析转染的系膜细胞中TGF-β1、纤连蛋白(FN)及胶原(Col)Ⅳ蛋白水平,并与无转染的系膜细胞对照组比较其表达的变化.结果构建了含TGF-β1反义RNA的重组腺病毒.重组反义TGF-β1腺病毒转染系膜细胞后,与对照组相比,在第24hTGF-β1及ColⅣ的mRNA无明显抑制,在48 h TGF-β1及ColⅣmRNA抑制率分别为22.5%,18.2%;72 h TGF-β1及ColⅣmRNA抑制率分别为29.5%,27.3%.免疫组织化学半定量结果显示:与对照组相比,在48 h始转染系膜细胞TGF-β1、FN及ColⅣ蛋白含量开始下降,48 h TGF-β1、FN及ColⅣ蛋白抑制率分别为16.5%,18.2%及14.6%;72 h TGF-β1、FN及ColⅣ蛋白抑制率分别为23.5%,27.3%及26.8%.结论重组反义TGF-β1可抑制系膜细胞合成细胞外基质,在肾小球肾炎及肾小球硬化的研究及治疗中有潜在的应用价值.

目的探讨核因子κB(NF-κB)和周期素激酶抑制剂(CKI)p21、p27在糖尿病高血压进展中的可能机制及非选择性内皮素受体阻断剂波生坦(bosentan)的干预作用.方法自发性高血压大鼠经链脲佐菌素诱导成的糖尿病模型(SHR-DM),设非选择性内皮素受体阻断剂波生坦(bosentan)+长效钙离子拮抗剂氨氯地平(amlodipine)组、amlodipine组、血管紧张素转换酶抑制剂西拉普利(cilazapril)组和非治疗组,4周后用免疫组织化学方法和Western blot方法观察肾脏NF-κB、p21、p27与转化生长因子(TGF-β1)的变化.结果bosentan可以明显抑制SHR-DM组肾脏NF-κB、TGF-β1、p21和p27的表达,其肾脏保护作用与cilazapril相似.结论bosentan的肾脏保护作用可能与干预NF-κB-TGF-β1-p21、p27通路有关.

目的观察N-糖链抑制剂衣霉素(TM)对肾小球系膜细胞(GMC)增殖、凋亡及纤连蛋白(FN)的影响.方法用流式细胞仪和透射电镜观察GMC凋亡.四唑氮盐法(MTT法)测定TM对GMC增殖的影响.间接竞争抑制酶联免疫吸附法观察TM对细胞外基质(EMC)成分FN的影响.结果TM可抑制GMC的增殖(与对照组相比P＜0.05),且呈剂量和时间依赖性;并可诱导GMC凋亡,除0.1μg/ml组外(P＞0.05),其它处理组都可增加细胞凋亡率,且随时间延长和剂量增加呈上升趋势(P＜0.05),电镜下可见GMC呈典型的凋亡形态学改变.与对照组比较,TM可减少上清FN含量(P＜0.05).结论TM能够抑制GMC增殖,诱导细胞凋亡且呈剂量和时间依赖性,并可减少细胞外基质(ECM)生成.

目的研究洛沙坦对糖尿病大鼠肾组织一氧化氮(NO)水平的影响.方法雄性Wistar大鼠分为3组,A组(11只)为正常对照组,B组(11只)为糖尿病未干预组,C组(9只)为糖尿病大鼠洛沙坦干预组.以链脲菌素制备糖尿病大鼠模型,大鼠饲养18周后取出肾脏检测诱导型NO合成酶(iNOS)mRNA的表达,电镜检测大鼠肾小球基底膜厚度及系膜基质密度(系膜基质面积/系膜面积).收集24 h尿测定尿白蛋白排泄(UAE)及肌酐,并心脏内取血检测血肌酐.mRNA表达采用RT-PCR,以β-actin作为内对照.UAE测定采用大鼠白蛋白特异的酶免疫分析试剂盒.结果肾组织iNOS mRNA表达在B组大鼠(0.30±0.12)显著高于A组(0.12±0.04,P＜0.01),C组(0.25±0.14)与B组比较差异无显著性意义(P＞0.05).肾组织NO水平在B组大鼠[(0.56±0.20)μmol/mg肾组织]显著低于A组[(1. 05±0.25)μmol/mg肾组织]和C组[(1.13±0.62)μmol/mg肾组织,P均＜0.01].UAE在B组大鼠[(2.18±1.98)mg/d]显著高于A组[(0.41±0.47)mg/d]和C组[(0.65±0.89)mg/d,P均＜0.05].肌酐清除率在B组大鼠[(19.75±9.60)ml/d]显著低于A组[(59.63±22.75)ml/d]和C组[(40.88±25.57)ml/d,P均＜0.05].基底膜厚度在B组大鼠[(531.6±107.6)nm]显著高于A组[(312.4±25.4)nm]和C组[(316.6±33.3)nm,P均＜0.05].系膜基质密度在B组大鼠(56.41±6.78)显著高于A组(33.95±5.22)和C组(35.37±6.70,P均＜0.05).结论在实验糖尿病大鼠,肾组织iNOS mRNA表达明显增加,但NO水平明显降低;洛沙坦干预不但能延缓糖尿病肾病的发生,还能增加肾组织NO水平,但不改变iNOS mRNA表达.

目的研究甲状旁腺激素(PTH)对大鼠系膜细胞合成与分泌转化生长因子β1(TGF-β1)的影响.方法(1)分别以10-12、10-11、10-10、10-8、10-8mol/l的hPTH1-34刺激大鼠系膜细胞6、12、24、48 h后,ELISA方法测定上清中TGF-β1的浓度;(2)分别以10-12、10-11、10-10、10-9、10-8mol/L的hPTH1-34刺激大鼠系膜细胞48 h,采用半定量RT-PCR方法检测细胞TGF-β1 mRNA的表达;(3)以10-8mol/L的hPTH1-344分别刺激大鼠系膜细胞6、12、24、48 h,采用半定量RT-PCR方法检测细胞TGF-β1 mRNA的表达.结果(1)ELISA结果显示,hPTH1-34促进大鼠系膜细胞合成与分泌TGF-β1,且具有浓度依赖和时间依赖性特点,当PTH浓度为10-8mol/L时,其促TGF-β1分泌作用达高峰(P＜0.01);(2)半定量RT-PCR方法结果显示,hPTH1-34促进大鼠系膜细胞TGF-β1 mRNA的表达,并具有浓度依赖和时间依赖性特点(各组与对照组间P＜0.05).结论hPTH1一从蛋白和基因水平显著促进系膜细胞TGF-β1的合成与分泌,且呈浓度依赖和时间依赖性特点.

目的研究他丁类降脂药物对肾小球系膜细胞增殖的影响.方法应用羟甲基戊二酰辅酶A(HMG-CoA)还原酶抑制剂洛伐他丁来观察其对培养的大鼠肾小球系膜细胞增殖的影响.用含有或没有洛伐他丁和甲羟戊酸及其代谢产物的10%胎牛血清或血小板源生长因子(PDGF)刺激培养的大鼠肾小球系膜细胞,然后用测定溴化脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)的整合来评估DNA的合成并测定细胞的数量.结果洛伐他丁对10%胎牛血清刺激系膜细胞DNA的合成抑制是剂量依赖性,并且能够抑制细胞的生长.甲羟戊酸,焦磷酸牻牛儿基牻牛儿酯能够显著地逆转洛伐他丁的抑制作用.结论洛伐他丁通过影响甲羟戊酸的合成抑制鼠肾小球系膜细胞的增殖,这可能为治疗系膜增殖性肾小球疾病提供一个新的方法.

目的探讨糖尿病肾病(DN)发病过程中肾小球蛋白激酶C(PKC)同工酶的表达变化及其与DN发生、发展的关系.方法将实验动物随机分为正常对照组及STZ-DM模型组.在模型成功后2周、4周和12周,采用免疫组织化学方法检测肾小球PKC同工酶的表达变化情况.结果在肾小球内,PKCα在DM发病2周、4周、12周时表达显著上升;PKCβI、PKCβⅡ在DM发病2周时表达明显下降,4周、12周时逐渐上升;PKCε的表达无显著性变化.结论在DN发病过程中的不同阶段,PKC各同工酶在肾小球内的表达变化不同,对DN的发生、发展也有着不同的调控效应.

目的研究肾细胞凋亡与常染色体显性遗传性多囊肾病(ADPKD)肾组织进行性缺失的关系.方法采用琼脂糖凝胶电泳、电镜和原位末端标记(TUNEL)法、Hoechst 33342染色法测定正常肾组织、ADPKD肾组织和体外培养的ADPKD囊肿衬里上皮细胞中凋亡DNA片段.对Tunel法结果作定量分析,计算机图象分析ADPKD肾脏CT检查中残余肾组织/囊肿组织截面积比值,与肾功能衰竭程度作相关分析.结果无或有肾功能衰竭的ADPKD肾组织中肾小球、肾小管上皮和囊肿衬里上皮细胞、体外培养的ADPKD囊肿衬里上皮细胞均发生凋亡.正常肾组织中无细胞凋亡.ADPKD肾组织中平均每10个高倍视野凋亡的肾细胞计数,肾功能正常组(A组,3.60±1.22)与氮质血症期组(B组,8.17±1.56)、终末期肾衰组(C组,17.81±3.15)间比较差异有非常显著性意义(P＜0.01).ADPKD肾组织中凋亡肾细胞数与肾功能衰竭程度显著相关(r=0.95,P＜0.01).ADPKD残余肾组织/囊肿组织截面积比值,A组(2.04±0.32)与B组(0.91±0.03)、C组(0.37±0.09)间比较差异有非常显著性意义(P＜0.01).ADPKD肾功能分期相同组中凋亡肾细胞数与残余肾组织/囊肿组织截面积比值呈负相关(r=-0.90,P＜0.05).ADPKD残余肾组织/囊肿组织截面积比值与肾功能衰竭程度呈负相关(r=-0.80,P＜0.05).结论ADPKD肾组织中,肾细胞凋亡显著增加,这可能是导致正常肾组织逐渐缺失和肾功能进行性损害的机制之一.体外培养的ADPKD囊肿衬里上皮细胞发生凋亡,表明凋亡是ADPKD的一种遗传性细胞异常.

目的确定由Twardowski提出的腹膜平衡试验(PET)的转运类型评判值是否适合本中心患者.方法选取我院自1995年来首次进行PET测试的患者158例.首先依据Twardowski的评判标准(值)判断患者的转运类型,再根据本组患者实际4 h D/Pcr的x-±s来确定患者的溶质转运类型,然后将患者重新分组:按两种数值均符合高转运为HI组,均符合平均转运为A组,均符合低转运为L1组,部分高转运患者经重新评价后符合平均转运为H2组,部分平均转运患者经重新评价后符合低转运为L2组.通过与临床情况(溶质和水的清除)进行对照,以进一步评价更适合本中心患者的评判标准.结果按照Twardowski的标准,高转运、高平均转运、低平均转运及低转运患者的比例分别为21.5%、44.9%、27.8%及5.7%.本研究患者群中4 h D/Pcr的均值和标准差为0.70和0.14,据此重新评判后,各组的比例分别为14.6%、33.5%、33.5%及18.4%.经与临床结果相对比,L2组对水份的清除能力明显高于A组(P＜0.005),与L1组差别无显著性意义.结论4 h D/Pcr在不同的地区和人群中表现出不同的均数和标准差值,因而产生了不同的腹膜转运类型.根据本中心患者人群确定的值更适合本中心患者的临床情况.

目的了解正常孕期糖基化血红蛋白值的正常值. 方法选择糖代谢正常的孕中晚期妇女455例,其中孕24～28周孕妇231例,28+1～32周者159例,32+1～36周者31例,>36周者34例,测血糖基化血红蛋白值. 结果 455例孕妇血糖基化血红蛋白值为(4.1±0.8)%,各孕周之间糖基化血红蛋白值无明显差别.结果正常糖代谢孕妇糖基化血红蛋白平均值为4.1%,95%的可信区间为2.5%～5.7%. 结论妊娠后半期糖基化血红蛋白的正常值范围为2.5%～5.7%.

目的了解正常孕期糖基化血红蛋白值的正常值. 方法选择糖代谢正常的孕中晚期妇女455例,其中孕24～28周孕妇231例,28+1～32周者159例,32+1～36周者31例,>36周者34例,测血糖基化血红蛋白值. 结果 455例孕妇血糖基化血红蛋白值为(4.1±0.8)%,各孕周之间糖基化血红蛋白值无明显差别.结果正常糖代谢孕妇糖基化血红蛋白平均值为4.1%,95%的可信区间为2.5%～5.7%. 结论妊娠后半期糖基化血红蛋白的正常值范围为2.5%～5.7%.

目的了解正常孕期糖基化血红蛋白值的正常值. 方法选择糖代谢正常的孕中晚期妇女455例,其中孕24～28周孕妇231例,28+1～32周者159例,32+1～36周者31例,>36周者34例,测血糖基化血红蛋白值. 结果 455例孕妇血糖基化血红蛋白值为(4.1±0.8)%,各孕周之间糖基化血红蛋白值无明显差别.结果正常糖代谢孕妇糖基化血红蛋白平均值为4.1%,95%的可信区间为2.5%～5.7%. 结论妊娠后半期糖基化血红蛋白的正常值范围为2.5%～5.7%.

目的了解正常孕期糖基化血红蛋白值的正常值. 方法选择糖代谢正常的孕中晚期妇女455例,其中孕24～28周孕妇231例,28+1～32周者159例,32+1～36周者31例,>36周者34例,测血糖基化血红蛋白值. 结果 455例孕妇血糖基化血红蛋白值为(4.1±0.8)%,各孕周之间糖基化血红蛋白值无明显差别.结果正常糖代谢孕妇糖基化血红蛋白平均值为4.1%,95%的可信区间为2.5%～5.7%. 结论妊娠后半期糖基化血红蛋白的正常值范围为2.5%～5.7%.

目的 探讨内窥镜控制下直接经蝶入路切除垂体腺瘤的方法. 方法 22例垂体腺瘤患者,在内窥镜控制下,经单鼻孔进入,术中不切除鼻中隔,直接自蝶窦开口打开蝶窦前壁,进一步经鞍底切除垂体腺瘤. 结果 22例患者中,15例肿瘤全部切除,7例肿瘤次全切除.术后随访1～12个月,17例患者内分泌功能恢复正常.4例术后发生暂时性尿崩症. 结论内窥镜控制下直接经蝶切除垂体腺瘤入路与目前常规经蝶显微手术比较,入路途径较短,且安全简捷、损伤小,手术显露良好,术后反应小,值得进一步推广.

目的 探讨内窥镜控制下直接经蝶入路切除垂体腺瘤的方法. 方法 22例垂体腺瘤患者,在内窥镜控制下,经单鼻孔进入,术中不切除鼻中隔,直接自蝶窦开口打开蝶窦前壁,进一步经鞍底切除垂体腺瘤. 结果 22例患者中,15例肿瘤全部切除,7例肿瘤次全切除.术后随访1～12个月,17例患者内分泌功能恢复正常.4例术后发生暂时性尿崩症. 结论内窥镜控制下直接经蝶切除垂体腺瘤入路与目前常规经蝶显微手术比较,入路途径较短,且安全简捷、损伤小,手术显露良好,术后反应小,值得进一步推广.

目的 探讨内窥镜控制下直接经蝶入路切除垂体腺瘤的方法. 方法 22例垂体腺瘤患者,在内窥镜控制下,经单鼻孔进入,术中不切除鼻中隔,直接自蝶窦开口打开蝶窦前壁,进一步经鞍底切除垂体腺瘤. 结果 22例患者中,15例肿瘤全部切除,7例肿瘤次全切除.术后随访1～12个月,17例患者内分泌功能恢复正常.4例术后发生暂时性尿崩症. 结论内窥镜控制下直接经蝶切除垂体腺瘤入路与目前常规经蝶显微手术比较,入路途径较短,且安全简捷、损伤小,手术显露良好,术后反应小,值得进一步推广.

目的筛选和鉴定培养的人肾小球系膜细胞(MsC)在血管紧张素Ⅱ(AngiotensinⅡ,AngⅡ)作用下,产生以纤连蛋白(Fibronectin,FN)为代表的细胞外基质成分的过程中上调表达的基因,寻找AngⅡ致细胞外基质堆积作用的相关基因,为探讨AngⅡ在肾小球硬化发展过程的分子机制奠定基础.方法人MsC经AngⅡ(10-6mol/L)刺激24 h后,采用抑制性消减杂交(suppressionsubtractive hybridization,SSH)获得AngⅡ相关的差异表达的cDNA,经纯化克隆到pGEM-Teasy Vector并转化大肠杆菌;随机选择120个克隆,经反向Northern筛选上调表达的基因cDNA片段,并以Northern杂交验证,然后进行DNA序列测定和同源性比较.采用5'-和3'-RACE及长距离PCR的方法获得新基因的全长cDNA.结果在120个随机选择的克隆中,反向Northern结果表明有55个克隆表达明显上调.挑选其中20个克隆进行DNA序列测定,结果显示18个为独立的基因片段序列(有两个序列为双拷贝),其中15个为已知基因,包括细胞外基质成分:如血小板反应素Ⅰ、Ⅰ型胶原α2;细胞骨架及结合蛋白:如平滑肌肌动蛋白a钙调蛋白1、γ-胞浆型肌动蛋白等;合成和代谢相关蛋白:如醛缩酶A、延长因子1-γ、arnesyl pyrophosphate synthetase等;蛋白分解相关蛋白:如组织蛋白酶、泛素蛋白连接酶等.3个克隆(克隆104、52、46)与已知序列没有明显同源性,提示为新基因.3个新基因分别命名为AngRem(AngiotensinⅡrelated genein mesangial cells)104、AngRem52、AngRem46,GenBank登录号分别为AF367870、AY040225、AY040224.结论对已知基因的分析表明,AngⅡ对细胞外基质具有双重作用,即:既刺激培养的人MsC细胞外基质成分表达上调,也通过刺激PAI-Ⅰ等分子的表达而抑制细胞外基质成分的降解.此外,我们还发现了目前尚未报告的与AngⅡ对MsC的生物学效应-细胞外基质堆积和增生等作用相关的基因(包括3个新基因),为揭示AngⅡ介导的MsC在肾小球硬化进展过程的可能分子机制提供了新的线索.

目的筛选和鉴定培养的人肾小球系膜细胞(MsC)在血管紧张素Ⅱ(AngiotensinⅡ,AngⅡ)作用下,产生以纤连蛋白(Fibronectin,FN)为代表的细胞外基质成分的过程中上调表达的基因,寻找AngⅡ致细胞外基质堆积作用的相关基因,为探讨AngⅡ在肾小球硬化发展过程的分子机制奠定基础.方法人MsC经AngⅡ(10-6mol/L)刺激24 h后,采用抑制性消减杂交(suppressionsubtractive hybridization,SSH)获得AngⅡ相关的差异表达的cDNA,经纯化克隆到pGEM-Teasy Vector并转化大肠杆菌;随机选择120个克隆,经反向Northern筛选上调表达的基因cDNA片段,并以Northern杂交验证,然后进行DNA序列测定和同源性比较.采用5'-和3'-RACE及长距离PCR的方法获得新基因的全长cDNA.结果在120个随机选择的克隆中,反向Northern结果表明有55个克隆表达明显上调.挑选其中20个克隆进行DNA序列测定,结果显示18个为独立的基因片段序列(有两个序列为双拷贝),其中15个为已知基因,包括细胞外基质成分:如血小板反应素Ⅰ、Ⅰ型胶原α2;细胞骨架及结合蛋白:如平滑肌肌动蛋白a钙调蛋白1、γ-胞浆型肌动蛋白等;合成和代谢相关蛋白:如醛缩酶A、延长因子1-γ、arnesyl pyrophosphate synthetase等;蛋白分解相关蛋白:如组织蛋白酶、泛素蛋白连接酶等.3个克隆(克隆104、52、46)与已知序列没有明显同源性,提示为新基因.3个新基因分别命名为AngRem(AngiotensinⅡrelated genein mesangial cells)104、AngRem52、AngRem46,GenBank登录号分别为AF367870、AY040225、AY040224.结论对已知基因的分析表明,AngⅡ对细胞外基质具有双重作用,即:既刺激培养的人MsC细胞外基质成分表达上调,也通过刺激PAI-Ⅰ等分子的表达而抑制细胞外基质成分的降解.此外,我们还发现了目前尚未报告的与AngⅡ对MsC的生物学效应-细胞外基质堆积和增生等作用相关的基因(包括3个新基因),为揭示AngⅡ介导的MsC在肾小球硬化进展过程的可能分子机制提供了新的线索.

目的筛选和鉴定培养的人肾小球系膜细胞(MsC)在血管紧张素Ⅱ(AngiotensinⅡ,AngⅡ)作用下,产生以纤连蛋白(Fibronectin,FN)为代表的细胞外基质成分的过程中上调表达的基因,寻找AngⅡ致细胞外基质堆积作用的相关基因,为探讨AngⅡ在肾小球硬化发展过程的分子机制奠定基础.方法人MsC经AngⅡ(10-6mol/L)刺激24 h后,采用抑制性消减杂交(suppressionsubtractive hybridization,SSH)获得AngⅡ相关的差异表达的cDNA,经纯化克隆到pGEM-Teasy Vector并转化大肠杆菌;随机选择120个克隆,经反向Northern筛选上调表达的基因cDNA片段,并以Northern杂交验证,然后进行DNA序列测定和同源性比较.采用5'-和3'-RACE及长距离PCR的方法获得新基因的全长cDNA.结果在120个随机选择的克隆中,反向Northern结果表明有55个克隆表达明显上调.挑选其中20个克隆进行DNA序列测定,结果显示18个为独立的基因片段序列(有两个序列为双拷贝),其中15个为已知基因,包括细胞外基质成分:如血小板反应素Ⅰ、Ⅰ型胶原α2;细胞骨架及结合蛋白:如平滑肌肌动蛋白a钙调蛋白1、γ-胞浆型肌动蛋白等;合成和代谢相关蛋白:如醛缩酶A、延长因子1-γ、arnesyl pyrophosphate synthetase等;蛋白分解相关蛋白:如组织蛋白酶、泛素蛋白连接酶等.3个克隆(克隆104、52、46)与已知序列没有明显同源性,提示为新基因.3个新基因分别命名为AngRem(AngiotensinⅡrelated genein mesangial cells)104、AngRem52、AngRem46,GenBank登录号分别为AF367870、AY040225、AY040224.结论对已知基因的分析表明,AngⅡ对细胞外基质具有双重作用,即:既刺激培养的人MsC细胞外基质成分表达上调,也通过刺激PAI-Ⅰ等分子的表达而抑制细胞外基质成分的降解.此外,我们还发现了目前尚未报告的与AngⅡ对MsC的生物学效应-细胞外基质堆积和增生等作用相关的基因(包括3个新基因),为揭示AngⅡ介导的MsC在肾小球硬化进展过程的可能分子机制提供了新的线索.

目的筛选和鉴定培养的人肾小球系膜细胞(MsC)在血管紧张素Ⅱ(AngiotensinⅡ,AngⅡ)作用下,产生以纤连蛋白(Fibronectin,FN)为代表的细胞外基质成分的过程中上调表达的基因,寻找AngⅡ致细胞外基质堆积作用的相关基因,为探讨AngⅡ在肾小球硬化发展过程的分子机制奠定基础.方法人MsC经AngⅡ(10-6mol/L)刺激24 h后,采用抑制性消减杂交(suppressionsubtractive hybridization,SSH)获得AngⅡ相关的差异表达的cDNA,经纯化克隆到pGEM-Teasy Vector并转化大肠杆菌;随机选择120个克隆,经反向Northern筛选上调表达的基因cDNA片段,并以Northern杂交验证,然后进行DNA序列测定和同源性比较.采用5'-和3'-RACE及长距离PCR的方法获得新基因的全长cDNA.结果在120个随机选择的克隆中,反向Northern结果表明有55个克隆表达明显上调.挑选其中20个克隆进行DNA序列测定,结果显示18个为独立的基因片段序列(有两个序列为双拷贝),其中15个为已知基因,包括细胞外基质成分:如血小板反应素Ⅰ、Ⅰ型胶原α2;细胞骨架及结合蛋白:如平滑肌肌动蛋白a钙调蛋白1、γ-胞浆型肌动蛋白等;合成和代谢相关蛋白:如醛缩酶A、延长因子1-γ、arnesyl pyrophosphate synthetase等;蛋白分解相关蛋白:如组织蛋白酶、泛素蛋白连接酶等.3个克隆(克隆104、52、46)与已知序列没有明显同源性,提示为新基因.3个新基因分别命名为AngRem(AngiotensinⅡrelated genein mesangial cells)104、AngRem52、AngRem46,GenBank登录号分别为AF367870、AY040225、AY040224.结论对已知基因的分析表明,AngⅡ对细胞外基质具有双重作用,即:既刺激培养的人MsC细胞外基质成分表达上调,也通过刺激PAI-Ⅰ等分子的表达而抑制细胞外基质成分的降解.此外,我们还发现了目前尚未报告的与AngⅡ对MsC的生物学效应-细胞外基质堆积和增生等作用相关的基因(包括3个新基因),为揭示AngⅡ介导的MsC在肾小球硬化进展过程的可能分子机制提供了新的线索.

目的筛选和鉴定培养的人肾小球系膜细胞(MsC)在血管紧张素Ⅱ(AngiotensinⅡ,AngⅡ)作用下,产生以纤连蛋白(Fibronectin,FN)为代表的细胞外基质成分的过程中上调表达的基因,寻找AngⅡ致细胞外基质堆积作用的相关基因,为探讨AngⅡ在肾小球硬化发展过程的分子机制奠定基础.方法人MsC经AngⅡ(10-6mol/L)刺激24 h后,采用抑制性消减杂交(suppressionsubtractive hybridization,SSH)获得AngⅡ相关的差异表达的cDNA,经纯化克隆到pGEM-Teasy Vector并转化大肠杆菌;随机选择120个克隆,经反向Northern筛选上调表达的基因cDNA片段,并以Northern杂交验证,然后进行DNA序列测定和同源性比较.采用5'-和3'-RACE及长距离PCR的方法获得新基因的全长cDNA.结果在120个随机选择的克隆中,反向Northern结果表明有55个克隆表达明显上调.挑选其中20个克隆进行DNA序列测定,结果显示18个为独立的基因片段序列(有两个序列为双拷贝),其中15个为已知基因,包括细胞外基质成分:如血小板反应素Ⅰ、Ⅰ型胶原α2;细胞骨架及结合蛋白:如平滑肌肌动蛋白a钙调蛋白1、γ-胞浆型肌动蛋白等;合成和代谢相关蛋白:如醛缩酶A、延长因子1-γ、arnesyl pyrophosphate synthetase等;蛋白分解相关蛋白:如组织蛋白酶、泛素蛋白连接酶等.3个克隆(克隆104、52、46)与已知序列没有明显同源性,提示为新基因.3个新基因分别命名为AngRem(AngiotensinⅡrelated genein mesangial cells)104、AngRem52、AngRem46,GenBank登录号分别为AF367870、AY040225、AY040224.结论对已知基因的分析表明,AngⅡ对细胞外基质具有双重作用,即:既刺激培养的人MsC细胞外基质成分表达上调,也通过刺激PAI-Ⅰ等分子的表达而抑制细胞外基质成分的降解.此外,我们还发现了目前尚未报告的与AngⅡ对MsC的生物学效应-细胞外基质堆积和增生等作用相关的基因(包括3个新基因),为揭示AngⅡ介导的MsC在肾小球硬化进展过程的可能分子机制提供了新的线索.

目的筛选和鉴定培养的人肾小球系膜细胞(MsC)在血管紧张素Ⅱ(AngiotensinⅡ,AngⅡ)作用下,产生以纤连蛋白(Fibronectin,FN)为代表的细胞外基质成分的过程中上调表达的基因,寻找AngⅡ致细胞外基质堆积作用的相关基因,为探讨AngⅡ在肾小球硬化发展过程的分子机制奠定基础.方法人MsC经AngⅡ(10-6mol/L)刺激24 h后,采用抑制性消减杂交(suppressionsubtractive hybridization,SSH)获得AngⅡ相关的差异表达的cDNA,经纯化克隆到pGEM-Teasy Vector并转化大肠杆菌;随机选择120个克隆,经反向Northern筛选上调表达的基因cDNA片段,并以Northern杂交验证,然后进行DNA序列测定和同源性比较.采用5'-和3'-RACE及长距离PCR的方法获得新基因的全长cDNA.结果在120个随机选择的克隆中,反向Northern结果表明有55个克隆表达明显上调.挑选其中20个克隆进行DNA序列测定,结果显示18个为独立的基因片段序列(有两个序列为双拷贝),其中15个为已知基因,包括细胞外基质成分:如血小板反应素Ⅰ、Ⅰ型胶原α2;细胞骨架及结合蛋白:如平滑肌肌动蛋白a钙调蛋白1、γ-胞浆型肌动蛋白等;合成和代谢相关蛋白:如醛缩酶A、延长因子1-γ、arnesyl pyrophosphate synthetase等;蛋白分解相关蛋白:如组织蛋白酶、泛素蛋白连接酶等.3个克隆(克隆104、52、46)与已知序列没有明显同源性,提示为新基因.3个新基因分别命名为AngRem(AngiotensinⅡrelated genein mesangial cells)104、AngRem52、AngRem46,GenBank登录号分别为AF367870、AY040225、AY040224.结论对已知基因的分析表明,AngⅡ对细胞外基质具有双重作用,即:既刺激培养的人MsC细胞外基质成分表达上调,也通过刺激PAI-Ⅰ等分子的表达而抑制细胞外基质成分的降解.此外,我们还发现了目前尚未报告的与AngⅡ对MsC的生物学效应-细胞外基质堆积和增生等作用相关的基因(包括3个新基因),为揭示AngⅡ介导的MsC在肾小球硬化进展过程的可能分子机制提供了新的线索.

目的了解正常孕期糖基化血红蛋白值的正常值. 方法选择糖代谢正常的孕中晚期妇女455例,其中孕24～28周孕妇231例,28+1～32周者159例,32+1～36周者31例,>36周者34例,测血糖基化血红蛋白值. 结果 455例孕妇血糖基化血红蛋白值为(4.1±0.8)%,各孕周之间糖基化血红蛋白值无明显差别.结果正常糖代谢孕妇糖基化血红蛋白平均值为4.1%,95%的可信区间为2.5%～5.7%. 结论妊娠后半期糖基化血红蛋白的正常值范围为2.5%～5.7%.

目的了解正常孕期糖基化血红蛋白值的正常值. 方法选择糖代谢正常的孕中晚期妇女455例,其中孕24～28周孕妇231例,28+1～32周者159例,32+1～36周者31例,>36周者34例,测血糖基化血红蛋白值. 结果 455例孕妇血糖基化血红蛋白值为(4.1±0.8)%,各孕周之间糖基化血红蛋白值无明显差别.结果正常糖代谢孕妇糖基化血红蛋白平均值为4.1%,95%的可信区间为2.5%～5.7%. 结论妊娠后半期糖基化血红蛋白的正常值范围为2.5%～5.7%.