2009年 · 第25卷第07期

足细胞即肾小球脏层上皮细胞,是一种高度特异、终末分化、位于基底膜最外层的上皮细胞,与基底膜、肾小球内皮细胞共同构成肾小球滤过屏障。

目的 研究舒洛地特对糖尿病高血压大鼠的肾脏保护作用和足细胞podocalyxin（PCX）表达的影响。方法链脲佐菌素（STZ）注射后，醋酸脱氧皮质酮（DOCA）＋盐建立糖尿病高血压大鼠模型。设对照组（CTL组）、模型组（STZ＋DOCA组）、舒洛地特治疗组（GAG组）和舒洛地特＋替米沙坦治疗组（GAG＋ARB组），每组各6只大鼠。于建模后0、2、4、6和8周测尾动脉压、尿白蛋白和8周末尿N-乙酰-β-葡萄糖苷酶（NAG）。8周末取血检测胰岛素、血肌酐（Scr）、胆固醇（TC）、三酰甘油（TG）、Na^＋、K^＋。HE、PAS染色观察病理改变和。肾小球正切面足细胞计数。免疫组织化学检测podocalyxin在肾小球表达和分布。RT—PCR和Western印迹法检测podocalyxinmRNA和蛋白表达。结果（1）GAG＋ARB组4周末血压显著低于STZ＋DOCA组和GAG组（P〈0．05）。GAG组和GAG＋ARB组TG、TC和胰岛素与STZ＋DOCA组差异无统计学意义。（2）6周末GAG＋ARB组尿白蛋白量显著低于STZ＋DOCA组[（52．9±7．6）mg／24h比（102．2±6．9）mg／24h，P〈0．05]；8周末GAG组和GAG＋ARB组尿白蛋白量均显著低于STZ＋DOCA组（P〈0．05），而GAG＋ARB组尿白蛋白量显著低于GAG组[（33．8±6．8）mg／24h比（85．2±8．7）mg／24h，P〈0．05]。GAG＋ARB组和GAG组尿NAG均显著低于STZ＋DOCA组（P〈0．05）。（3）GAG组和GAG＋ARB组肾小球硬化指数（GSI）和间质纤维化指数（IF）均显著低于STZ＋DOCA组（P〈0．05），各组肾小球正切面足细胞数差异无统计学意义。（4）与STZ＋DOCA组相比，GAG组PCXmRNA和蛋白表达显著增加，而GAG＋ARB组PCX表达显著高于GAG组。结论舒洛地特可通过增加足细胞podocalyxin表达，减轻糖尿病高血压大鼠蛋白尿和病理损伤，与替米沙坦联用有叠加作用。

目的 研究舒洛地特对糖尿病高血压大鼠的肾脏保护作用和足细胞pedocalyxin(PCX)表达的影响.方法 链脲佐菌素(STZ)注射后,醋酸脱氧皮质酮(DOCA)+盐建立糖尿病高血压大鼠模型.设对照组(CTL组)、模型组(STZ+DOCA组)、舒洛地特治疗组(GAG组)和舒洛地特+替米沙坦治疗组(GAG+ARB组),每组各6只大鼠.于建模后0、2、4、6和8周测尾动脉压、尿白蛋白和8周末尿N-乙酰-β-葡萄糖苷酶(NAG).8周末取血检测胰岛素、血肌酐(Scr)、胆同醇(TC)、三酰甘油(TG)、Na+、K+.HE、PAS染色观察病理改变和肾小球正切面足细胞计数.免疫组织化学检测podocalyxin在肾小球表达和分布.RT-PCR和Western印迹法检测podocalyxin mRNA和蛋白表达.结果 (1)GAG+ARB组4周末血压显著低于STZ+DOCA组和GAG组(P<0.05).GAG组和GAG+ARB组TG、TC和胰岛素与STZ+DOCA组差异无统计学意义.(2)6周末GAG+ARB组尿白蛋白量显著低于STZ+DOCA组[(52.9±7.6)mg/24 h比(102.2±6.9)mg/24 h,P<0.05];8周末GAG组和GAG+ARB组尿门蛋白量均显著低于STZ+DOCA组(P<0.05),而GAG+ARB组尿白蛋白量显著低于GAG组[(33.8±6.8)mg/24 h比(85.2±8.7)mg/24 h,P<0.05].GAG+ARB组和GAG组尿NAG均显著低于STZ+DOCA组(P<0.05).(3)GAG组和GAG+ARB组肾小球硬化指数(GSI)和间质纤维化指数(IF)均显著低于STZ+DOCA组(P<0.05).各组肾小球正切面足细胞数差异无统计学意义.(4)与STZ+DOCA组相比,GAG组PCX mRNA和蛋白表达显著增加,而GAG+ARB组PCX表达显著高于GAG组.结论 舒洛地特可通过增加足细胞podocalyxin表达,减轻糖尿病高血压大鼠蛋白尿和病理损伤,与替米沙坦联用有叠加作用。

目的 观察醛同酮(ALD)刺激对足细胞培养上清液中基质金属蛋白酶2、9(MMP-2、MMP-9)活性、Ⅳ型胶原的影响及探讨ALD对足细胞细胞外基质分泌、降解的调节机制.方法 分别用不同浓度ALD(10-11、10-9、10-7mol/L)以不同时间(24、48、72 h)作用足细胞,并设立空白对照组.用明胶酶谱、Western印迹、ELISA方法检测培养上清液中MMP-2、MMP-9、Ⅳ型胶原α5链及TGF-β1;流式细胞仪检测足细胞黏附率,同时观察ALD受体拮抗剂螺内酯(SPI)及TGF-β1受体抑制剂对上述效应的阻断作用.结果 与对照组相比,ALD以时间及剂量依赖性导致培养上清液中MMP-2、MMP-9活性升高(P<0.05);Ⅳ型胶原α5链蛋白表达下降(P<0.05);TGF-β1蛋白表达升高(P<0.05).SPI可完全阻断,而TGF-β1受体抑制剂SB431542可部分阻断ALD刺激足细胞引起的MMP-2、MMP-9活性升高、Ⅳ型胶原α5链蛋白及足细胞黏附率的下降(P<0.05).结论 ALD通过TGF-β1途径使足细胞MMP-2、MMP-9活性升高,Ⅳ型胶原α5链蛋白表达下降,足细胞黏附率下降,从而使足细胞分泌基底膜成分异常,基底膜合成及降解失衡,导致足细胞损伤。

目的 观察嘌呤霉素(PAN)和地塞米松(DEX)对足细胞分子podocin表达和分布的影响,探讨DEX改善蛋白尿的机制.方法 体外培养小鼠足细胞(MPC5),分为对照组、PAN组和DEX组.对照组用含0.02%DMSO的RPMI-1640培养液培养;PAN组加入PAN;DEX组同时加入PAN和DEX.处理后8 h、24 h和48 h,观察细胞形态并摄像,用图像处理软件分析各组细胞形态及胞体面积的差异.用RT-PCR、Western印迹和间接免疫荧光染色榆测各时间点pedocin mRNA和蛋白的表达及分布.结果 正常足细胞呈星形,胞体大并有树样突起,细胞相互连接.PAN刺激8 h,足细胞胞体面积缩小,为对照组的43%;24 h为10%;48h为5.7%(P<0.01);部分足细胞足突及细胞连接消失.DEX组在8 h、24 h和48 h,足细胞胞体面积显著大于PAN组,分别为对照组的43.9%、26.2%及29.6%(P<0.05),足突形态正常.PAN组podocin mRNA表达量呈下降趋势,蛋白表达量显著降低(P<0.01),分布异常.DEX组podocin mRNA和蛋白的表达量及分布与对照组相似,48 h时mRNA和蛋白的表达量均显著高于PAN组(P<0.05).结论 DEX直接作用于足细胞,稳定pedocin mRNA和蛋白的表达量及分布,该作用可能与其能保护足细胞及改善蛋白尿有关。

目的 观察嘌呤霉素（PAN）和地塞米松（DEX）对足细胞分子podocin表达和分布的影响，探讨DEX改善蛋白尿的机制。方法体外培养小鼠足细胞（MPC5），分为对照组、PAN组和DEX组。对照组用含0．02％DMSO的RPMI-1640培养液培养；PAN组加入PAN；DEX组同时加入PAN和DEX。处理后8h、24h和48h，观察细胞形态并摄像，用图像处理软件分析各组细胞形态及胞体面积的差异。用RT—PCR、Western印迹和间接免疫荧光染色检测各时间点podocin mRNA和蛋白的表达及分布。结果正常足细胞呈星形，胞体大并有树样突起，细胞相互连接。PAN刺激8h，足细胞胞体面积缩小，为对照组的43％；24h为10％；48h为5．7％（P〈0．01）；部分足细胞足突及细胞连接消失。DEX组在8h、24h和48h，足细胞胞体面积显著大于PAN组，分别为对照组的43．9％、26．2％及29．6％（P〈0．05），足突形态正常。PAN组podoein mRNA表达量呈下降趋势，蛋白表达量显著降低（P〈0．01），分布异常。DEX组podocin mRNA和蛋白的表达量及分布与对照组相似，48h时mRNA和蛋白的表达量均显著高于PAN组（P〈0．05）。结论DEX直接作用于足细胞，稳定podocin mRNA和蛋白的表达量及分布，该作用可能与其能保护足细胞及改善蛋白尿有关。

目的 研究高脂诱导的大鼠肾小球足细胞损害及肾组织整合素连接激酶(ILK)的表达.方法 36只Wistar大鼠分3组:高脂饮食组给予高脂饲料喂养;辛伐他汀组在高脂饲料喂养同时,予辛伐他汀10 mg·kg-1·d-1干预;正常对照组予正常饮食.于实验第4、10周各处死6只鼠,留取血清及.肾组织,采用酶法测定血清三酰甘油(TG)及总胆固醇(TC)水平;电镜观察足细胞结构变化;Western印迹法检测肾组织ILK及结蛋白(desmin)的蛋白表达;RT-PCR检测ILK mRNA表达;免疫组化染色观察肾组织ILK的阳性分布.结果 (1)与正常对照组比较,高脂饮食组及辛伐他汀组大鼠血脂水平升高,足细胞足突明显融合,结蛋白表达显著上调;辛伐他汀组上述指标均显著轻于高脂饮食组,组间两两比较,差异有统计学意义(P<0.01).(2)与正常对照组比较,高脂饮食组和辛伐他汀组大鼠肾组织ILK mRNA及蛋白表达显著增加;辛伐他汀组肾组织ILK mRNA及蛋白表达显著低于高脂饮食组,组间两两比较,差异有统计学意义(P<0.01).免疫组化染色显示ILK主要表达在足细胞和肾小管上皮细胞,各组ILK阳性染色与Western印迹结果一致.(3)直线回归结果显示,肾组织结蛋白表达与ILK蛋白表达呈正相关(r=0.93107,R2=0.8669,P<0.01).结论 高脂饮食导致大鼠肾小球足细胞损害,该损害与ILK表达增高有关.辛伐他汀可抑制ILK表达,减轻高脂饮食大鼠足细胞的损害。

瞬时受体电位阳离子通道蛋白6(TRPC6)是新近发现的联系足细胞裂孔隔膜与细胞骨架的重要分子,TRPC6功能异常在遗传性及获得性蛋白尿性肾小球疾病蛋白尿的发生、发展中起重要作用。

血管内皮细胞生长因子(VEGF)在.肾脏主要由足细胞产生[1]。

目的 分析中国汉族人家族性激素耐药型肾病综合征(SRNS)家系WT1和PLCE1基因突变及其特点.方法 研究对象为A、B、C 3个汉族人SRNS家系的先证者(已除外NPHS2基因突变)及其父母,A、B 2个家系先证者的姐姐,50例尿检正常的汉族成年人作为对照人群.取所有研究对象外周静脉血3 ml,提取基因组DNA,PCR扩增WT1基因全部10个外显子和PLCE1基因全部31个编码外显子及其周围的部分内含子,应用直接DNA序列测定法和限制性片段长度多态性PCR(RFLP-PCR)分析法检测WT1和PLCE1基因变异.结果 未发现WT1和PLCE1基因的致病突变.但是,在3个SRNS家系的先证者检测到3个WT1基因多态性:126C>T(P42P)、ⅣS5-64A>G和903A>G(R300R),其中ⅣS5-64A>G为新发现的WT1基因多态性,126C>T和903A>G已见文献报道;还检测到13个PLCE1基因多态性-134A>G、810T>C(C270C)、960G>A(E320E)、ⅣS11-28C>G、ⅣS15+26A>C、4724G>C(R1575P)、ⅣS20+40C>T、ⅣS21+64G>A、ⅣS22-26T>A、5320C>T(T1777I)、5780A>G(H1927R)、ⅣS27+24A>G和ⅣS31+48_49insT,其中ⅣS22-26T>A为新发现的PLCE1基因多态性,其余12个PLCE1基因多态性已见公布.结论 WT1和PLCE1基因突变不是本研究3个中国汉族人家族性SRNS家系的主要致病原因。

目的 探讨中国人Gitelman综合征(GS)的表型特点以及性别因素对GS表型的影响.方法 分析了28例GS患者的临床表现以及血、尿电解质、血pH、血管紧张素、血醛固酮、血压等水平,比较男性、女性GS患者两组之间的差异.临床表现症状通过问卷调查获得,肾小球滤过率(GFR)通过简化MDRD公式(成人)、Schwartz公式(18岁以下青少年)或同位素法评估.结果 男性患者中夜尿增多的比例显著高于女性患者(P<0.05),但发病年龄、四肢乏力、软瘫、手足抽搐等症状的发生差异无统计学意义.男性患者血肌酐明显高于女性患者[(82.7±43.3)μmol/L比(58.7±12.7)μmol/L1,但经体表面积校正后的.肾小球滤过率差异并无统计学意义[(143.0±48.4)ml·min-1·(1.73 m2) -1比(138.0±38.9)ml·min-1·(1.73 m2) -1].男性GS患者尿钾排泄分数和尿氯排泄分数显著高于女性患者(33.0%±22.9%比17.0%±4.7%;2.30%±1.59%比1.23%±0.39%,均P<0.05),但两组间血钾、血氯、血镁、血碳酸氢根离子、血管紧张素、血醛同酮、尿pH、24 h尿钾、尿氯离子排泄总量差异均无统计学意义.3例肾功能受损的患者均为男性.结论 男性GS患者的夜尿发生要多于女性患者,男性GS患者的肾功能可能更易受损,性别因素对表型的影响町能与雌激素影响钠氯共转子在远端小管的密度有关。

目的 探讨肾移植术后急性排斥发生后环孢素(CsA)切换成他克莫司(FK506)抗排斥治疗对移植肾的影响.方法 回顾性分析本中心肾移植患者发生病理证实的急性排斥86例,经过抗排斥治疗后有23例由CsA治疗切换成FKS06为基础的免疫抑制治疗(FK506组),63例继续应用CsA为基础的免疫抑制治疗(CsA组).比较两组临床资料,包括性别、年龄、冷和热缺血时间、淋巴毒、术前群体反应性抗体(PRA)水平、人类门细胞抗原(HLA)错配、血脂、血清肌酐、血尿酸、再次排斥的发生率和移植肾存活等情况.结果 抗排斥治疗后1年内再次病理证实的排斥率,FK506组显著低于CsA组[1/23(4.35%)比16/63(25.40%),P=0.0331.FKS06组急性排斥发生后5年内的移植肾存活率为100%,高于CsA组的81.4%.FK506组急性排斥发生后24个月及36个月血尿酸分别为(265.5±147.9)Ixmol/L和(245.8±88.9)μmol/L,均显著低于CsA组的(428.5±119.3)μmol/L和(441.2±125.3)μmol/L(P<0.01).结论 肾移植术后急性排斥发生后由CsA治疗切换成FK506治疗可降低再次排斥的发生率,而降低血尿酸水平有利移植肾的存活。

目的 探讨霉酚酸酯(MMF)对糖尿病(DM)大鼠肾脏的保护作用及其机制.方法 将实验动物分为正常对照组、DM组及MMF治疗组.MMF组给予MMF(15 mg/kg,口服,1次/d)治疗.8周后检测各组大鼠尿蛋白量(24 h)、内生肌酐清除率(Ccr)、血糖;HE染色观察肾脏病理改变;免疫组化及RT-PCR法检测肾组织中基质金属蛋白酶9(MMP-9)、转化生长因子β1(TGF-β1)的表达.结果 DM组大鼠血糖[(22.18±3.36)mmol/L比(6.40±0.87)mmol/L]、尿蛋白量(24 h)[(26.80±0.82)mg比(6.64±1.42)mg]、Cer[(0.220±0.380)ml/min比(0.098±0.015)ml/min]显著高于对照组(P<0.05).MMF组的尿蛋白量(24 h)[(16.17±1.15)mg]、Ccr[(0.220±0.380)ml/min比(0.207±0.377)ml/min]均显著低于DM组(P<0.05).与DM组比较,MMF组肾小球肿大、系膜细胞增生显著减轻.肾组织中MMP.9在对照组表达较多,主要在肾小球系膜细胞胞质内及肾小管上皮细胞,DM组表达较弱,MMF组介于两组之间,组间差异均有统计学意义(P<0.05).TGF-β1在正常对照组大鼠肾组织有少量表达,在DM组表达较强,在MMF组介于两组之间,组间差异亦均有统计学意义(P<0.05).结论 MMF可降低DM大鼠尿蛋白排泄、Ccr,减轻早期肾小球肥大.此作用可能与MMF上调肾组织中MMP-9表达、下调TGF-β1的表达、减少系膜外基质的沉积有关。

目的 研究白细胞介素6(IL-6)对体外培养人脐动脉平滑肌细胞(HUASMC)成骨样转化、钙化的作用及可能的信号通路.方法 组织植块法原代培养HUASMC.培养基加入不同浓度重组人IL-6(rhIL-6)孵育细胞,设空白对照组.茜素红S钙沉积染色及甲氧.酚酞络合酮法榆测细胞层钙盐含量.实时定量PCR、荧光定量法以及Western印迹法分别检测骨特异性碱性磷酸酶(BAP)、骨桥蛋白(OPN)、骨形成蛋白2(BMP2)和骨保护素(OPG)基因以及蛋白表达.凝胶迁移滞后实验(EMSA)检测核心结合因子α1亚基(Cbfα1)的结合活力,以及分别应用p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)抑制剂SB203580和蛋白激酶C二氢神经鞘氨醇(DHC)后Cbfα1的结合活力.结果 rhlL-6 50μg/L诱导12 d,细胞基质层茜素红S染色阳性.与对照组相比,细胞层钙盐含量在rhIL-6 10 μg/L组刺激9 d[(0.76+0.02)mmol/g蛋白]和12 d[(1.54±0.11)mmol/g蛋白]升高,50μg/L组刺激6 d[(1.81±0.03)mmol/g蛋白]、9 d[(2.08±0.10)mmol/g蛋白]和12 d[(3.22±0.18)mmol/g蛋白]升高,并呈时间、剂量依赖地增加.rhIL-6 10μg/L刺激12 h,BMP2 mRNA(3.04±0.07)和蛋白(8.14±0.41)及BAP mRNA(2.51±0.11)和蛋白(3.96±0.54)表达上调;刺激72 h,OPN mRNA(3.14±0.32)和蛋白(2.57±0.43)水平及OPG mRNA(4.06±0.24)和蛋白(3.46±0.34)水平上调.rhIL-6刺激6 h,Cbfα1结合活力增加;DHC能够部分抑制rhIL-6诱导的Cbfα1结合活力增加,SB203580没有明显作用.结论 IL-6体外能够诱导HUASMC发生钙化和成骨样转分化,这可能是临床观察到IL-6与血管钙化相关的机制之一.IL-6的这一作用可能与细胞内蛋白激酶C通路的活化有关。

目的 探讨基于直接标记法的尿微量白蛋白检测抗体微阵列(也称抗体芯片)构建方法,并评价其技术可行性.方法 通过玻片处理、活化、固定等程序构建白蛋白抗体芯片.摸索用生物素标记标准品白蛋白及尿液样本的最佳条件.经封闭后加入生物索标记的标准品向蛋白,孵育,洗涤后加入链酶亲和素-Cy3,再经过孵育、洗涤后,用共聚焦激光扫描仪获取荧光强度值.根据不同浓度标准品白蛋白的荧光信号强度值做出浓度-信号强度曲线,并评价其检测灵敏度、特异性、重复性.收集临床糖尿病患者尿液标本,对尿液样本同时行免疫比浊法和抗体芯片法检测白蛋白值.结果 生物素标记标准品白蛋白和样本的最佳总蛋白/生物素质量比为2:1.根据标准品白蛋白所做出的标准曲线其R2>0.99;捕获抗体浓度为1g/L时,最低白蛋白检测浓度为0.0617 mg/L.阵列内变异系数为3.35%～7.59%;阵列间变异系数为6.78%～9.22%.抗体芯片检测值与免疫比浊法检测值呈正相关(R2=0.9199,P<0.01).结论 成功构建基于直接标记法的抗体芯片,其具有简单、快速、高效、高灵敏度和重复性好等特点;具有开发应用于微量白蛋白尿大规模人群筛查的潜力。

多囊肾病(PKD)是一种严重危害人类健康的疾病,按遗传方式町分为常染色体显性多囊肾病(ADPKD)和常染色体隐性多囊肾病(ARPKD)两种。

降钙素(caleitonin)是调节骨代谢的激素之一,由甲状腺滤泡旁细胞分泌,具有广泛的生物学活性.1961年首次被Copp等…发现,并广泛的应用于代谢性骨病的治疗。

过去的几十年中,人们对肾脏微循环和氧合状态的研究主要依赖侵入性探针[1,2].它可以精确地测量生理、病理和药物干预条件下的.肾脏组织内的血流量和组织氧分压。

计量单位实行国务院1984年2月颁布的《中华人民共和国法定计量单位》，并以单位符号表示，具体使用参照中华医学会编辑出版部编辑的《法定计量单位在医学上的应用》一书。血压计量单位使用毫米汞柱（mmHg），

自发性肾周出血在临床上尤其是血液透析患者中少见,现报告1例,以提高对该病的认识。

患者,女,60岁,10年前出现反复尿频、尿急、尿痛、双下肢和面部水肿,间断服利尿剂和抗生素.入院前24 d出现洗肉水样小便和右上腹部疼痛,伴反复阵发性寒颤、高热39.8℃,每次持续4 h。

腹膜透析(PD)管的引流通畅及持久在位是PD的基本条件.我们观察到,传统(即高位)PD置管术的漂管率较高,究其原因后对其进行了低位改良。

高通量透析既能清除低分子毒素,也能清除部分中大分子毒素.本研究采用交叉试验设计,旨在比较高通量透析与低通量透析对维持性血液透析(血透)患者血压的影响。

尿毒症患者血管狭窄及闭塞可导致动静脉内瘘手术失败.我们对血管条件较差的患者采用硬膜外麻醉导管探查血管及管腔内注入肝素利多卡因盐水,使手术成功率大大提高。

肾性骨病是维持性血透(MHD)患者的主要并发症之一.我们探讨血液透析串联血液灌流(HD+HF)对MHD患者肾性骨病的作用。

经国家新闻出版总署批准，《中国临床营养杂志》于2009年3月正式成为中华医学会系列杂志之一，并更名为《中华临床营养杂志》（CN11—5822／R）。

合理抗凝是肾病综合征(NS)治疗的重要部分.低分子肝素(LMWH)虽然目前应用于NS患者治疗.但有效剂量和给药方式尚不清楚.本研究通过应用Sonoclot分析仪及酶联免疫法动态监测达肝素钠干预前后NS患者的凝血指标,探讨LMWH治疗NS的合理用法。

大量证据表明,糖尿病肾病(DN)时肾小管间质病变的严重程度与蛋白尿排泄量和肾功能的进行性下降密切相关,提示肾小管上皮细胞(TEC)损伤在DN进程中占有重要地位。

慢性肾脏病(CKD)是一个严重影响人类健康的公共卫生问题,不同国家和地区的流行病学调查显示患者的数量惊人且在逐年递增。

婴幼儿先天性肾脏畸形往往与泌尿系统及其他系统或体表的多种先天畸形并存,发生率较高[1],成为影响胎儿成活率和患儿生活质量的重要因素。